Interphase Nucleus Metaphase chromosomes labeled with DNA probe (arrows) centromere of chromosome 1
读六荧光原位杂交的特点: 1)快速;2)信号强;3)特异性高;4)多色。 六六FISH有上述优点的原因 1)使用了荧光标记与检测系统取代放射性标记与检测系统 标记探针的物质:(1)生物素boin)地高辛( digoxigenin) 半抗原报告分子(间接标记) (2)荧光物质(直接标记) Cy2或 FluorO(绿色)/Cy3(橙色)/Cy35(猩红色)Cy5(红色)Aqua(兰色) 间接标记的信号检测(抗 biotin!或 digoxigenin抗体上连接荧光物质)物质: conjugated to avidin or antibody of digoxigenin (1) Fluorescein isothiocyanate((FITC或 Bidopy绿色 (2) Texas red, Rhodamine,红色 (3)AMCA—兰色 染色体复染的物质 Propidium lodide(PD)(红色),DAPI(兰色), quInacrine(绿色), chromomycin a3(绿色)
**荧光原位杂交的特点： 1）快速；2）信号强；3）特异性高；4）多色。 **FISH有上述优点的原因： 1）使用了荧光标记与检测系统取代放射性标记与检测系统 标记探针的物质：（1）生物素(biotin)/地高辛(digoxigenin) ——半抗原报告分子（间接标记） （2）荧光物质（直接标记） Cy2或FluorX(绿色) / Cy3(橙色) / Cy3.5(猩红色) / Cy5(红色) / Aqua(兰色) 间接标记的信号检测（抗biotin或digoxigenin抗体上连接荧光物质）物质： conjugated to avidin or antibody of digoxigenin (1)Fluorescein isothiocyanate(FITC)或Bidopy——绿色 (2)Texas Red, Rhodamine, ——红色 (3)AMCA——兰色 染色体复染的物质: Propidium Iodide (PI)（红色），DAPI（兰色），quinacrine（绿色）， chromomycine A3（绿色）
2)染色体“原位抑制”杂交( chromosome in situ suppression,CISS) 克服散在的重复序列造成的杂交背景,提高信号的特异性,在探针中加入过量 的未标记的竞争性 DNA(competitor DNA),如 human cot-1DNA,进行杂交前 的预复性。探针中的重复序列与加入的竞争物中的大量重复序列优先复性,而 特异性的单拷贝序列因竞争物中同源序列拷贝数少,绝大部分仍保持单链状态。 读FISH技术的应用 1)基因(或DNA片段)的染色体定位; 2)染色体数目与结构异常的检测; 3)间期细胞遗传学(绒毛羊水精子/卵裂球其它间期细胞研究与诊断) 4)肿瘤遗传学研究
2）染色体“原位抑制”杂交（chromosome in situ suppression, CISS) 克服散在的重复序列造成的杂交背景，提高信号的特异性，在探针中加入过量 的未标记的竞争性DNA(competitor DNA)，如human Cot-1 DNA，进行杂交前 的预复性。探针中的重复序列与加入的竞争物中的大量重复序列优先复性，而 特异性的单拷贝序列因竞争物中同源序列拷贝数少，绝大部分仍保持单链状态。 **FISH技术的应用 1）基因（或DNA片段）的染色体定位； 2）染色体数目与结构异常的检测； 3）间期细胞遗传学（绒毛/羊水/精子/卵裂球/其它间期细胞研究与诊断）； 4）肿瘤遗传学研究
用于FISH的探针 1)单拷贝探针: (1)种类:YAC,BAC, Cosmid, Plasmid,cDNA片段 (2)应用 (a)定位DNA片段及嵌合体克隆验证; (b)确定染色体微小缺失与重复; (c)染色体断裂点分析 (d)间期细胞染色体数目异常诊断
**用于FISH的探针 1）单拷贝探针： （1）种类：YAC， BAC， Cosmid，Plasmid， cDNA片段 （2）应用 （a）定位DNA片段及嵌合体克隆验证； （b）确定染色体微小缺失与重复； （c）染色体断裂点分析。 （d）间期细胞染色体数目异常诊断