CH.OH CHOH o CIL.OH 11 F(S0:I为 (亚所酸品红》 敦红色物) 图1-3PAS反应原理示意图 2,脂类脂类物质包括脂肪和类脂。标本用甲醛固定，冷冻切片，脂类保存较好。多用苏 丹染料、油红0、尼罗蓝等溶于脂类的染料染色，使脂质呈色。也可用四氧化饿(OsO4)染 色，脂肪酸或胆碱可使0s04还原为0s02而呈黑色， 3.酶细胞内的酶种类甚多，有氧化还原酶、水解酶、合成酶、转移酶等几类，目前已有 100多种酶组织化学染色法。酶组化反应的基本原理是利用酶对其相应底物的水解、氧化等作 用，然后再使底物的反应产物与某种捕获剂发生反应，形成沉淀或有色的最终产物，借此检测 该酶在组织切片或细胞内的分布及活性强弱。如细胞的磷酸酶是一种重要的水解酶，碱性磷酸 酶(ALP)和酸性磷酸酶(ACP)在合适的pH条件下可水解有机磷酸脂。小肠上皮细胞表面的 纹状缘和肾近曲小管表面的刷状缘处，微绒毛含有丰富的ALP,与物质的吸收和转运功能相 关；许多细胞的溶酶体内则含大量ACP,参与细胞内物质代谢。这两种酶均可以B-甘油磷酸 钠为底物，底物被水解产生磷酸根，再以Ca2+、C02+(显示ALP)或Pb2+(显示ACP)捕获磷酸 根，最后用硫化铵处理，即形成硫化钴或硫化铅黑色最终产物，出现在组织切片中该酶存在的 部位。因此，酶组化染色不是酶本身的直接显色，而是酶作用底物的化学反应产物显色的。 4.核酸显示DNA的传统方法是Feulgen反应，切片先用稀盐酸处理，使DNA分子中脱氧 核糖与嘌呤之间的连接键打开，形成醛基，再与Schiff试剂作用，原理同PAS反应，使细胞核 DNA显紫红色。还可用甲基绿-焦宁染色法同时显示DNA和RNA,这两种染料都是碱性，甲 基绿使细胞核内的DNA呈蓝绿色，焦宁使细胞质和核仁内的RNA呈红色
图1－3 PAS反应原理示意图 2．脂类脂类物质包括脂肪和类脂。标本用甲醛固定，冷冻切片，脂类保存较好。多用苏 丹染料、油红O、尼罗蓝等溶于脂类的染料染色，使脂质呈色。也可用四氧化锇（OSO4）染 色，脂肪酸或胆碱可使OSO4还原为OSO2而呈黑色。 3．酶细胞内的酶种类甚多，有氧化还原酶、水解酶、合成酶、转移酶等几类，目前已有 100多种酶组织化学染色法。酶组化反应的基本原理是利用酶对其相应底物的水解、氧化等作 用，然后再使底物的反应产物与某种捕获剂发生反应，形成沉淀或有色的最终产物，借此检测 该酶在组织切片或细胞内的分布及活性强弱。如细胞的磷酸酶是一种重要的水解酶，碱性磷酸 酶（ALP）和酸性磷酸酶（ACP）在合适的pH条件下可水解有机磷酸脂。小肠上皮细胞表面的 纹状缘和肾近曲小管表面的刷状缘处，微绒毛含有丰富的ALP，与物质的吸收和转运功能相 关；许多细胞的溶酶体内则含大量ACP，参与细胞内物质代谢。这两种酶均可以β－甘油磷酸 钠为底物，底物被水解产生磷酸根，再以Ca 2+、Co 2+ (显示ALP)或Pb 2+（显示ACP）捕获磷酸 根，最后用硫化铵处理，即形成硫化钴或硫化铅黑色最终产物，出现在组织切片中该酶存在的 部位。因此，酶组化染色不是酶本身的直接显色，而是酶作用底物的化学反应产物显色的。 4．核酸 显示DNA的传统方法是Feulgen反应，切片先用稀盐酸处理，使DNA分子中脱氧 核糖与嘌呤之间的连接键打开，形成醛基，再与Schiff 试剂作用，原理同PAS反应，使细胞核 DNA显紫红色。还可用甲基绿－焦宁染色法同时显示DNA和RNA，这两种染料都是碱性，甲 基绿使细胞核内的DNA呈蓝绿色，焦宁使细胞质和核仁内的RNA呈红色
抗原 抗情 光 巴+一 被过化物 铁蛋白 图1·4免疫细胞化学术示意图 图1·5人呼吸道分离上皮细胞粘蛋白免疫荧光像 (美国戴维斯加州大学吴忍教授供图) (四)免疫细胞化学术 免疫细胞化学(immunocytochemistry)术是应用抗原与抗体结合的免疫学原理，检测细 胞内多肽、蛋白质及膜表面抗原和受体等大分子物质的存在与分布。这种方法特异性强，敏感 度高，进展迅速，应用广泛，成为生物学和医学众多学科的重要研究手段。近年随着纯化抗原 和制备单克隆抗体的广泛开展以及标记技术不断提高，免疫细胞化学的进展更是日新月异，不 仅用于许多基本理论的研究，并取得重大突破，而且也用于疾病的早期快速诊断等临床实际。 组织的多肽和蛋白质种类繁多，具有抗原性。分离纯化人或动物组织某种蛋白质，作为抗原注 入另一种动物体内，后者即产生相应的特异性抗体（免疫球蛋白）。从被免疫动物的血清中提 取出该抗体，再以荧光素、酶、铁蛋白或胶体金标记，用这种标记抗体处理组织切片或细胞， 标记抗体即与细胞的相应蛋白质（抗原）发生特异性结合（图14）。常用的荧光素是异硫氰酸 荧光素(FITC)和四甲基异硫氰酸罗丹明(TRITC)，在荧光显微镜下可观察荧光抗体抗原复
图1－4 免疫细胞化学术示意图 图1－5 人呼吸道分离上皮细胞粘蛋白免疫荧光像 （美国戴维斯加州大学 吴忍教授供图） （四）免疫细胞化学术 免疫细胞化学（immunocytochemistry）术是应用抗原与抗体结合的免疫学原理，检测细 胞内多肽、蛋白质及膜表面抗原和受体等大分子物质的存在与分布。这种方法特异性强，敏感 度高，进展迅速，应用广泛，成为生物学和医学众多学科的重要研究手段。近年随着纯化抗原 和制备单克隆抗体的广泛开展以及标记技术不断提高，免疫细胞化学的进展更是日新月异，不 仅用于许多基本理论的研究，并取得重大突破，而且也用于疾病的早期快速诊断等临床实际。 组织的多肽和蛋白质种类繁多，具有抗原性。分离纯化人或动物组织某种蛋白质，作为抗原注 入另一种动物体内，后者即产生相应的特异性抗体（免疫球蛋白）。从被免疫动物的血清中提 取出该抗体，再以荧光素、酶、铁蛋白或胶体金标记，用这种标记抗体处理组织切片或细胞， 标记抗体即与细胞的相应蛋白质（抗原）发生特异性结合（图1-4)。常用的荧光素是异硫氰酸 荧光素（FITC)和四甲基异硫氰酸罗丹明（TRITC），在荧光显微镜下可观察荧光抗体抗原复