重物 oZ LEMTEAR 吸水纸 分离 转移 尼龙膜 琼脂糖胶 RNA或用限制性内切 带有分离片段的琼脂糖胶 滤纸 酶消化的DNA片段 杂交 X光片 在尼龙膜 杂交自显影 上或带 的DNA 条带 RNA条 探针 图7-1 Southern杂交过程
6 图 7 -1 Southern杂交过程
Mbo藤切位点 个体I 200bp 350bp a 5 GATO 一-GATC - GATC---3 al 5'---GATC -------GATC GATC---3 200bp 350bp 个体Il GATC GATC 550b ------GATC---3 GATC ----- GTrC -------GATC---3 突变导致了一个酶切位点的丢失 以从a位点获得的350bp片段 作为探针进行 Southern杂交 片↑550bp 断 长|350bp 度 个体I 个体ll 图7-2RFLP检测
图 7 7 -2 RFLP检测
O聚合酶链式反应( polymerase chain reaction PCR) PCR是1985年建立的一种体外快速扩增特定基因或 DNA序列的方法。 原理:在反应温度为9095℃时,DNA变性成为单链; 反应温度降至4565℃时,两种引物与两条单链DNA退火而 配对结合;反应温度升至72℃左右时,在 TaqDNA聚合酶作 用下,引物以单链DNA为模板逐步延伸成新的单链。“变 性退火延伸”这一循环完成后,DNA复制了一次 由一个DNA分子成为两个DNA分子
8 ○ 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction , PCR） PCR是1985年建立的一种体外快速扩增特定基因或 DNA序列的方法。 原理：在反应温度为90—95℃时，DNA变性成为单链； 反应温度降至45—65℃时，两种引物与两条单链DNA退火而 配对结合；反应温度升至72℃左右时，在TaqDNA聚合酶作 用下，引物以单链DNA为模板逐步延伸成新的单链。“ 变 性——退火——延伸”这一循环完成后，DNA复制了一次， 由一个DNA分子成为两个DNA分子
双链DNA 引物 加热解链 引物 耐热DNA聚合酶 合成DNA 2条双链 DNA 解链DNA 再合成 图7-3 DNA 4条双链 DNA 扩增 二-- 原理 二5二-=--= 二二二二二二二22-25 大量DNA片段
9 图7-3 DNA 扩增 原理
○ PCR-RFLP 如果已知多态性位点周围的DNA序列,则可用 PCR快速而简单地进行RFLP分析。 首先根据多态位点两侧序列设计和合成引物;以 基因组DNA为模板进行PCR扩增;用相应的内切酶进 行消化;再进行电泳,分析PCR区带判断多态性
10 ○ PCR—RFLP 如果已知多态性位点周围的DNA序列，则可用 PCR快速而简单地进行RFLP分析。 首先根据多态位点两侧序列设计和合成引物；以 基因组DNA为模板进行PCR扩增；用相应的内切酶进 行消化；再进行电泳，分析PCR区带判断多态性