DNA聚合酶I e. coli dna聚合酶I( DNA pol I)是 个具有3种酶活性的多功能性酶。包括: 5′→3DNA聚合酶活性 5′→>3核酸外切酶活性 3′→5核酸外切酶活性
DNA聚合酶Ⅰ E. coli DNA聚合酶Ⅰ（DNA pol Ⅰ） 是一 个具有3 种酶活性的多功能性酶。包括： 5ˊ→3ˊDNA 聚合酶活性 5ˊ→3ˊ核酸外切酶活性 3ˊ→5ˊ核酸外切酶活性
DNA pol I的应用 ()催化DNA缺口平移反应,制备高 比活性DNA探针 (2)第二条cDNA链的合成; (3)对NA3突出末端进行标记; (4)DNA序列分析
⑴ 催化DNA缺口平移反应，制备高 比活性DNA探针； ⑵ 第二条cDNA链的合成； ⑶ 对DNA3’突出末端进行标记； ⑷ DNA序列分析。 DNA pol Ⅰ的应用
E. coli dNa po.I催化切口平移 5-35-35 DNase 2 M g 35 datP, dctP, dGTP E COIDNA POL [a-32P ]dTTP 35353535
E. coli DNA pol. Ⅰ催化切口平移
Klenow酶(片段)( DNA pOl.大片断) 36kD 76kD c大肠杆菌DNA聚合酶 543外切酶53聚合酶35外切酶 用枯草杆菌蛋白酶裂解全酶 N匚 C Klenow片段 5*3’聚合酶3+5外切酶
Klenow酶（片段）（DNA pol.大片断）
Klenow酶(片段)的用途 ()补齐双链DNA的 5 3 5 双链DNA 3末端; 外切酶Ⅲ (2)用标记碱基补5 3 齐3末端; 3 5′5-粘端 Klenow dNA聚合酶↓[a32P]dNTP (3)在cDNA克隆中,5 3′ 标记末端 用于第二股链 3′ 5′ 变性 的合成; 5′ 3′ (4)DNA序列分析。 标记探针 3′ 5
Klenow DNA聚合酶 [ - α32P]dNTP 双链DNA 5'-粘端 外切酶Ⅲ 变性 + 5' 3' 3' 5' 3' 5' 3' 5' 3' 3' 5' 5' 5' 3' 5' 3' 标记探针 标记末端 Klenow酶（片段）的用途 ⑴ 补齐双链DNA的 3ˊ末端； ⑵ 用标记碱基补 齐3ˊ末端 ； ⑶ 在cDNA克隆中， 用于第二股链 的合成； ⑷ DNA序列分析