重组DNA导入大肠杆菌的方法 LB培养受体菌冰浴15分钟 至OD60.50.62℃离心集菌 冰冷的水重悬菌体 少量冰冷的水,2℃离心收 重悬 冰冷的水重悬←2℃离心集菌 集菌体 菌体 分装成 电转仪调为 电击转化法 50-300uL 2.5kV,25uF On ice合→ 转化 05g质粒 脉冲控制器200 DNA 4009 101001转4液涂—37℃中速震荡60 加入1 mLSOC 含抗菌素的平板 分钟 培养液
一、重组DNA导入大肠杆菌的方法 LB培养受体菌 至OD600=0.5-0.6 冰浴15分钟， 2℃离心集菌 冰冷的水重悬菌体 冰冷的水重悬 2 ℃离心集菌 菌体 2 ℃离心收 集菌体 少量冰冷的水 重悬 分装成 50-300L 电转仪调为 2.5kV,25F 脉冲控制器200- 400 0.5g质粒 DNA On ice混合 加入1mLSOC 培养液 37 ℃中速震荡60 分钟 10-100L转化液涂 含抗菌素的平板 转化 电击转化法
二)转导 由噬菌体和细胞病毒介导的遗传信息的转 移过程 体外包装好的重组噬菌体感染受体菌,形成噬菌斑。 每λDNA能形成106个噬菌斑 (三)转染 噬菌体DNA不经过蛋白包装成病毒颗粒, 直接被感受态细胞捕获的过程。 与转化无本质区别 现在把DNA转移至动物细胞的过程也称 转染
（二） 转 导 由噬菌体和细胞病毒介导的遗传信息的转 移过程 （三） 转 染 噬菌体DNA不经过蛋白包装成病毒颗粒， 直接被感受态细胞捕获的过程。 与转化无本质区别 体外包装好的重组噬菌体感染受体菌，形成噬菌斑。 每g DNA能形成106个噬菌斑 现在把DNA转移至动物细胞的过程也称 转染
头部突 尾部突 变噬菌体 变噬菌体头部蛋白 尾部蛋白 重组DNA 感染细菌↓ 000 Sec 325257> 混|合 体 注入DNA 外包装过程 升温诱导 温育包装 0自自 溶解细菌 自自自 000 )< 提取头部蛋白 提取尾部蛋白
体外包装过程
重组DNA导入真核细胞 (-)导入酵母细胞 原生质体转化 2.碱金属离子介导的完整细胞转化 3.PEG100转化法 4.电击法 (二)导入植物细胞 (三)导入动物细胞
二、重组DNA导入真核细胞 （一）导入酵母细胞 1. 原生质体转化 2. 碱金属离子介导的完整细胞转化 3. PEG1000转化法 4. 电击法 （二）导入植物细胞 （三）导入动物细胞
1.利用原生质体进行转化 酶去壁 CaC 酵母 原生质体PEG感受态 转 插入外源基因的载体/化 转化细胞达原生质体总数的1%2%,转化率受 再生率影响 共转化的原生质体占转化子总数的25%~33%
1. 利用原生质体进行转化 酵母 原生质体 感受态 酶去壁 CaCl2 PEG 插入外源基因的载体 转 化 转化细胞达原生质体总数的1%~2%，转化率受 再生率影响 共转化的原生质体占转化子总数的25%~33%