第二节重组体导入受体细胞的原理 与技术 重组DNA导入大肠杆菌的方法 、重组DNA导入真核细胞的方法 转化率及影响因素
第二节 重组体导入受体细胞的原理 与技术 一、重组DNA导入大肠杆菌的方法 二、重组DNA导入真核细胞的方法 三、转化率及影响因素
重组DNA导入大肠杆菌的方法 相关概念 1转化( transformation) 细菌获得外源质粒DNA,产生新的遗传性状的过程 2转导( (transduction) 以噬菌体为媒介,将外源DNA导入细菌的过程。 3转染 transfection 指感受态的受体细胞捕获和表达以噬菌体为载体的重组DNA分子 的过程。 转导和转染的区别 转导:通过噬菌体(病毒)颗粒感染宿主细胞的途径把外源DNA 转移到受体细胞的过程 转染:λ噬菌体DNA分子直接导入受体细胞的过程
一、重组DNA导入大肠杆菌的方法 相关概念 1.转化(transformation) 细菌获得外源质粒DNA，产生新的遗传性状的过程。 2.转导(transduction) 以噬菌体为媒介，将外源DNA导入细菌的过程。 3.转染 (transfection) 指感受态的受体细胞捕获和表达以噬菌体为载体的重组DNA分子 的过程。 转导和转染的区别 转导：通过λ噬菌体（病毒）颗粒感染宿主细胞的途径把外源DNA 转移到受体细胞的过程。 转染：λ噬菌体DNA分子直接导入受体细胞的过程
(-)转化 ( transformation) (1)热激法( heat shock) (2)电转化法( electroporation) (3)PEG介导的原生质体转化 (4)接合转化
（一）转化 （transformation） （1）热激法（heat shock） （2）电转化法（electronporation） （3）PEG介导的原生质体转化 （4）接合转化
重组DNA导入大肠杆菌的方法 1、化学转化法 DNA enters 感受态:细菌能从周围环境中吸收 DNA的生理状态称为感受态( competence)m DNA from 感受态的出现是由于细菌表面出现 another bacterial cell 许多DNA结合位点,这些位点只能与双 Bacterial chromosome (DNA) 链DNA结合,而不与单链DNA结合。这 (a)Transformation 说明完整的双链结构对于转化活性来说是 必要的 Pha 对于大肠杆菌细胞,一般采用aCl2溶 液来处理受体细胞,增加细胞膜的通透性, Fragment of DNA from 制备感受态细胞。 another bacterial cell (previous phage (b)Transduction
一、重组DNA导入大肠杆菌的方法 1、化学转化法 感受态：细菌能从周围环境中吸收 DNA的生理状态称为感受态(competence). 感受态的出现是由于细菌表面出现 许多DNA结合位点，这些位点只能与双 链DNA结合，而不与单链DNA结合。 这 说明完整的双链结构对于转化活性来说是 必要的。 对于大肠杆菌细胞，一般采用CaCl2溶 液来处理受体细胞，增加细胞膜的通透性， 制备感受态细胞
重组DNA导入大肠杆菌的方法 连接到细胞外壁的质粒 正常细菌 cacl2处理 感受态细胞 42C 2min 转入细胞的质粒 转化细胞 图5-3感受态细菌细胞对DNA的结合和吸收
一、重组DNA导入大肠杆菌的方法