实验一细胞器的光学显微镜观 察
实验一 细胞器的光学显微镜观 察
实验目的 1、观察人、植物活细胞内线粒体和液泡系 的形态、数量与分布 2、学习一些细胞器的超活染色技术
实验目的 • 1、观察人、植物活细胞内线粒体和液泡系 的形态、数量与分布 • 2、学习一些细胞器的超活染色技术
实验原理 ·活体染色:能使生活有机体的细胞或组织特异性着色但对活样品又氵 有毒害作 种活体染色方法,基月的是显示先造细内的第 构,而不影响细胞的生 起细 胞的死亡。活体染色技术可用来研究生活状态下的细孢形态结构和生 理、病理状 默线网付花定多 资益支线焚圣流,舞速望定在摆 离子酸性柔料的胶粒表面带有阴离子而被染的部本身也是具有 阻离子惑阳离子这样 彼此之间就发 碱时,長望要2漫签新对无害性显 荷染料均可用 来,最为通用 指质如卵磷脂、胆醇等 体和液泡系的染色力别待零体桌色剂中最精中程红 的特性,易子被组吸收。,纳用绿B a nus gree neutral red 种碱性 ,对于线粒
实验原理 • 活体染色：能使生活有机体的细胞或组织特异性着色但对活样品又没 有毒害作用的一种活体染色方法，其目的是显示生活细胞内的某些结 构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细 胞的死亡。活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生 理、病理状态。 • 超活染色：体外活体染色又称超活染色，它是由活的动、植物分离出 部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的 某种结构上而显色。活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊 的部分，主要是靠染料的“电化学”特性。碱性染料的胶粒表面带阳 离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有 阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。但并非任 何染料均可用于活体染色，理论上应选择那些对细胞无毒性或毒性极 小的染料，且使用时需要配成稀淡的溶液。一般说来，最为适用的是 碱性染料，这可能是因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等) 的特性，易于被细胞吸收。詹纳斯绿B(Janus green B)和中性红 (neutral red)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒 体和液泡系的染色分别具有专一性
生物学实验中使用的染色剂分为酸性、碱性和中性,染色 剂的酸碱性与化学上用H+的离子浓度来定义溶液的酸碱 性不同,染色剂的酸碱性与染色剂的显色基团有关,由主 要显色基团是阳离子或是阴离子来确定,若染色剂的主要 显色基团是阳离子,为碱性染色剂;若染色剂的主要显色 基团为阴离子,为酸性染色剂;若染色剂的显色基团既有 阳离子也有阴离子则称为中性染色剂(又称复合染料)。 有丝分裂实验用的醋酸洋红和龙胆紫溶液的显色基团均为 阳离子,故都是碱性染色剂,亚甲基蓝、美蓝也是碱性染 料;酸性品红、伊红是酸性染料,苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ弱酸性 染料;对血液进行染色的赖特和吉姆萨是中性染色剂。 在细胞的组成中,原生质的碱性部分(如细胞质)容易 与含阴离子的酸性染料发生亲合力而结合;而原生质的酸 性部分(如染色质)容易与含阳离子的碱性染料发生亲合 力而发生作用。而红细胞具有特殊的性质能与中性染色剂 发生亲合力。由此可见细胞成分被染色的强弱与细胞成分 的酸碱性以及染料的性质有关
• 生物学实验中使用的染色剂分为酸性、碱性和中性，染色 剂的酸碱性与化学上用H+的离子浓度来定义溶液的酸碱 性不同，染色剂的酸碱性与染色剂的显色基团有关，由主 要显色基团是阳离子或是阴离子来确定，若染色剂的主要 显色基团是阳离子，为碱性染色剂；若染色剂的主要显色 基团为阴离子，为酸性染色剂；若染色剂的显色基团既有 阳离子也有阴离子则称为中性染色剂（又称复合染料）。 有丝分裂实验用的醋酸洋红和龙胆紫溶液的显色基团均为 阳离子，故都是碱性染色剂，亚甲基蓝、美蓝也是碱性染 料；酸性品红、伊红是酸性染料，苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ弱酸性 染料；对血液进行染色的赖特和吉姆萨是中性染色剂。 • 在细胞的组成中，原生质的碱性部分（如细胞质）容易 与含阴离子的酸性染料发生亲合力而结合；而原生质的酸 性部分（如染色质）容易与含阳离子的碱性染料发生亲合 力而发生作用。而红细胞具有特殊的性质能与中性染色剂 发生亲合力。由此可见细胞成分被染色的强弱与细胞成分 的酸碱性以及染料的性质有关
染色剂溶液的酸碱性 染色剂溶液的酸碱性是指染料溶 H值,例如醋酸洋红和龙 液在发性是平单为酸性 翻樣是婆新精个反发及是断需 要碱 cu2+与蛋白质的肽键反应形成紫色豆 文如洋红的等电点是pH4374.5时洋红的溶解度 红色的络全物 有在 的塗液史才累溶蟹 有改变一其中酸芬 的資液性但 的速度 色效果要好子1% )。 ·、由此可见染色剂的酸碱性不是指染色剂溶液的ρH值,而是指染色 剂对物质进行染色时与显色有关的主要基团是陌离子还是明离字
• 染色剂溶液的酸碱性 • 染色剂溶液的酸碱性是指染料溶液的pH值，例如醋酸洋红和龙胆 紫溶液均为碱性染料，但它们的溶液却是酸性，而曙红为酸性染料但 溶液是碱性，又如中性红是碱性染料而它的溶液呈中性。 • 染色剂溶液的酸碱性与试剂的成分、反应条件以及染料的溶解度等 因素有关。如斐林试剂需要新配制的Cu(OH)2溶液，而双缩脲试剂需 要碱性条件的Cu2+与蛋白质的肽键反应形成紫色或紫红色的络合物。 又如洋红的等电点是pH4.07-4.5，此时洋红的溶解度最小，只有在高 于或低于它的等电点的溶液中才易溶解，醋酸洋红的溶液呈酸性，但 它的显色基团的化学性质没有改变，其中的醋酸分子穿透组织的速度 快，并能够凝固核蛋白，更有利于对染色体的染色。同样用2%的醋 酸配制的1%龙胆紫溶液呈酸性，它对根尖分生区细胞内染色剂的染 色效果要好于1%龙胆紫水溶液。 • 由此可见染色剂的酸碱性不是指染色剂溶液的pH值，而是指染色 剂对物质进行染色时与显色有关的主要基团是阳离子还是阴离子