leading strand (in dUMP F) lagging strand (inO.F) DNA p DDNA ↓120800 augpouohraopnu Short DNA pieces 30 see 15 sec 7 sec istance from top ol tbe Relative distance from top ofube
pulse-labeling in dT-H3 ？ leading strand (in dUMP F.) lagging strand （in O. F.） Lig (ts)？ 直接证据？
CopyrightThe McG Companies.inc Perissionrd orreproduconay 5 3' 3 5 5 (a) 3 3 Priming of DNA Synthesis 51 3 5 5 3 5 3 5 6 5 3
3 Priming of DNA Synthesis
(DNA聚合酶不能发动子链DNA的复制起始) primer S.S.DNAvirus RF M13+ E.coli Rifalmpin M13 [Rifs] 无M13RF E.coli Rifalmpin [Rifs]M13 有M13RF Rifalmpin Rifalmpin(利福平，RNA polymerase的抑制剂) The first evidence supporting RNA priming
• primer ( DNA聚合酶不能发动子链DNA的复制起始 ) E.coli [Rif s ] [Rif S ] + M13 E.coli M13+ S.S. DNA virus + RF 无M13 RF Rifalmpin M13 Rifalmpin 有M13 RF Rifalmpin Rifalmpin(利福平,RNA polymerase的抑制剂) The first evidence supporting RNA priming
DNase cannot completely destroy Okazaki fragments Before After Tuneko Okazaki J.Mol.Biol.184(1985)p.49 DNase digestion DNase digestion labeled the intact primers on the Okazaki fragments with DNA/RNA primer [32p]GTP. destroyed DNA with DNase, leaving only the labeled primers. a and e;defective in RNase H; 15 b and f;defective DNase 10 13mer RNA c and g;defective in both primer labeled d and h;wild-type. with P32 5 2-
Before DNase digestion After DNase digestion DNA/RNA primer labeled the intact primers on the Okazaki fragments with [32p]GTP. destroyed DNA with DNase, leaving only the labeled primers. a and e; defective in RNase H; b and f ; defective DNase c and g; defective in both d and h; wild-type. DNase cannot completely destroy Okazaki fragments Tuneko Okazaki J. Mol. Biol. 184 (1985) p. 49 13mer RNA primer labeled with P32
4 Bidirectional Replication(双向复制) 44 图20.10大肠杆菌DNA复制的日模式(a)复制的大肠杆菌DNA放射自显影结果的说明 图，在放射性核苷酸存在的情况下，DNA经过一个复制循环和部分的第二个复制循 环，仅复制一次的DNA一条链被标记（蓝），另一条仍保持“冷淡”（未标记）链 (黑色虚线)，复制二次的DNA,一部分为双链标记（蓝色和红色线形成的B环）， 另一部分为单链标记（红色和黑色虚线形成的A环。(b)Cairns放射自显影实验结果 的解释，(c)更为详细地解释了DNA复制的θ模式。 two replicating forks(X and Y)！!！
4 Bidirectional Replication（双向复制） 图20.10 大肠杆菌DNA复制的模式 (a) 复制的大肠杆菌DNA放射自显影结果的说明 图，在放射性核苷酸存在的情况下，DNA经过一个复制循环和部分的第二个复制循 环，仅复制一次的DNA一条链被标记（蓝），另一条仍保持“冷淡”（未标记）链 （黑色虚线），复制二次的DNA，一部分为双链标记（蓝色和红色线形成的B环）， 另一部分为单链标记（红色和黑色虚线形成的A环。(b) Cairns放射自显影实验结果 的解释，(c)更为详细地解释了 DNA复制的模式。 two replicating forks(X and Y )!!!