针对不同性质的重组蛋白选择不同的层析类型 等电点处于极端区域(p|≤5或p≥8)的重组蛋白应首选离子 交换法进行分离,这样很容易除去几乎所有的杂蛋白; 重组蛋白特异性的配体、底物、抗体、糖链等都是首选亲合层析 纯化方法的重要条件,原则是它们与目标蛋白之间的解离常数应在合 适的范围内(103-104mol/L); 疏水层析和反相层析是根据蛋白质的疏水性差异进行分离的; 凝胶过滤层析是根据蛋白的分子量和体积差异进行分离的; 径向层析是近年来发展起来的集层析分离和膜分离于一体的一种 复合技术,在流量、负荷量等参数方面显示出极大的优越性
针对不同性质的重组蛋白选择不同的层析类型 针对不同性质的重组蛋白选择不同的层析类型 等电点 等电点处于极端区域（ 处于极端区域（pI pI≤5 ≤5 或或 pI pI≥8 ≥8）的重组蛋白应首选离子 ）的重组蛋白应首选离子 交换法进行分离，这样很容易除去几乎所有的杂蛋白； 交换法进行分离，这样很容易除去几乎所有的杂蛋白； 重组蛋白特异性的 重组蛋白特异性的配体、底物 配体、底物、、抗体、糖链等都是首选亲合层析 抗体、糖链等都是首选亲合层析 纯化方法的重要条件，原则是它们 纯化方法的重要条件，原则是它们与目标蛋白之间的解离常数应在合 与目标蛋白之间的解离常数应在合 适的范围内（10-8- 10 适的范围内（10-8- 10-4-4 mol / L mol / L）；）； 疏水层析 疏水层析和反相层析是根据蛋 和反相层析是根据蛋白质的 白质的疏水性差异进行分离的； 疏水性差异进行分离的； 凝胶过滤层析 凝胶过滤层析是根据蛋白的分子量和体积差异进行分离的； 是根据蛋白的分子量和体积差异进行分离的； 径向层析 径向层析是近年来发展起来的 是近年来发展起来的集集层析分离和膜分离于一体的一种 层析分离 和膜分离于一体的一种 复合技术，在流量、负荷量等参数方面显示出极大的优越性。 复合技术，在流量、负荷量等参数方面显示出极大的优越性
多种分离纯化技术的联合运用 在进行重组蛋白的纯化时,通常需要综合使用多种技术,一般来 说,在选择分离纯化方法时应遵循下列原则: ●应选择不同分离纯化机理的方法联合使用 ●应首先选择能除去含量最多杂质的方法 应尽量选择高效的分离方法 ●应将最费时、成本最高的分离纯化方法安排在最后阶段
多种分离纯化技术的联合运用 多种分离纯化技术的联合运用 在进行重组蛋白的纯化时，通 在进行重组蛋白的纯化时，通常需要综合使用多种技术，一般来 常需要综合使用多种技术，一般来 说，在选择分离纯化方法时应遵循下列原则： 说，在选择分离纯化方法时应遵循下列原则： 应选择不同分离纯化机理的方法联合使用 应选择不同分离纯化机理的方法联合使用 应首先选择能除去含量最多杂质的方法 应首先选择能除去含量最多杂质的方法 应尽量选择高效的分离方法 应尽量选择高效的分离方法 应将最费时、成本最高的分离纯化方法安排在最后阶段 应将最费时、成本最高的分离纯化方法安排在最后阶段
合适分离纯化介质的选择 常用的蛋白质分离纯化介质有 Sephadex和 Seperose。理想的分 离纯化介质应具有下列性质: 对目标蛋白具有较高的分离效率 对目标蛋白不会造成变性 ●化学性能和机械性能稳定,重复性好 价格低廉
合适分离纯化介质的选择 合适分离纯化介质的选择 常用的蛋白质分离纯化介质有 常用的蛋白质分离纯化介质有Sephadex Sephadex和和Seperose Seperose。理想的分 。理想的分 离纯化介质应具有下列性质： 离纯化介质应具有下列性质： 对目标蛋白具有较高的分离效率 对目标蛋白具有较高的分离效率 对目标蛋白不会造成变性 对目标蛋白不会造成变性 化学性能和机械性能稳定，重复性好 化学性能和机械性能稳定，重复性好 价格低廉 价格低廉
分离纯化过程的规模化 蛋白质分离纯化的实验室工艺、技术、方法在大规模产业化过程 未必合适,如 ●实验室方法在工程上可能难以实现(超声波破细胞壁) ●实验室方法在大规模生产中可能成本过高(超速离心) 因此,在很多情况下,实验室的技术路线不等于生产工艺
分离纯化过程的规模化 分离纯化过程的规模化 蛋白质分离纯化的实验室工艺 蛋白质分离纯化的实验室工艺、技术、方法在大规模产业化过程 、技术、方法在大规模产业化过程 未必合适，如： 未必合适，如： 实验室方法在工程上可能难以实现（超声波破细胞壁） 实验室方法在工程上可能难以实现（超声波破细胞壁） 实验室方法在大规模生产中可能成本过高（超速离心） 实验室方法在大规模生产中可能成本过高（超速离心） 因此，在很多情况下，实验室的技术路线不等于生产工艺。 因此，在很多情况下，实验室的技术路线不等于生产工艺
9外源基因表达产物的分离纯化 B离子交换层析 离子交换层析的基本原理 ●离子交换介质的基本性质 ●离子交换介质的选择原则 ●离子交换层析的基本操作
B 离子交换层析 9 外源基因表达产物的分离纯化 外源基因表达产物的分离纯化 离子交换层析的基本原理 离子交换层析的基本原理 离子交换介质的基本性质 离子交换介质的基本性质 离子交换层析的基本操作 离子交换层析的基本操作 离子交换介质的选择原则 离子交换介质的选择原则