CTRAL霉菌的检查刘云欢副教授
1 霉菌的检查 刘云欢 副教授
实验目的和要求了解和认识常见霉菌的基本形态特征■理解霉菌检查中染色的原理】掌握观察霉菌形态的基本方法及霉菌检查的临床意义2
实验目的和要求 ◼ 了解和认识常见霉菌的基本形态特征 ◼ 理解霉菌检查中染色的原理 ◼ 掌握观察霉菌形态的基本方法及霉菌检查的临床意义 2
实验材料R■菌种：根霉（Rhizopussp.）、毛霉（Mucorsp.）、曲霉（Aspergillus sp.）、青霉（Penicilliumsp.）的平板培养物。■培养基：土豆琼脂培养基（PDA）或察氏培养基。溶液或试剂：乳酸石炭酸棉蓝染色液。■其他：无菌吸管，平血，载玻片，盖玻片，解剖针，镊子，20%甘油，显微镜
实验材料 ◼ 菌种：根霉（Rhizopus sp.）、毛霉（Mucor sp.） 、曲霉（Aspergillus sp.）、青霉（Penicillium sp. ）的平板培养物。 ◼ 培养基：土豆琼脂培养基（PDA）或察氏培养基。 ◼ 溶液或试剂：乳酸石炭酸棉蓝染色液。 ◼ 其他：无菌吸管，平皿，载玻片，盖玻片，解剖针， 镊子，20%甘油，显微镜
原理■霉菌菌丝比较粗大（菌丝和孢子的直径达到3～10μm），常是细菌菌体宽度的几倍至几干倍，因而可用低倍、高倍镜观察。霉菌菌丝细胞容易收缩变形，抱子容易飞扬，在制备霉菌标本时，常用乳酸石炭酸溶液作为介质。乳酸石炭酸溶液具有不使细胞变形，可杀菌防腐，不易干燥，能保持较长时间等优点。若加入棉蓝，又具有一定的染色效果
原理 ◼ 霉菌菌丝比较粗大（菌丝和孢子的直径达到3～10μm ），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因而可用低 倍、高倍镜观察。霉菌菌丝细胞容易收缩变形，孢子 容易飞扬，在制备霉菌标本时，常用乳酸石炭酸溶液 作为介质。乳酸石炭酸溶液具有不使细胞变形，可杀 菌防腐，不易干燥，能保持较长时间等优点。若加入 棉蓝，又具有一定的染色效果。 4
方法及操作■点种培养：用接种针沾取斜面少许孢子在无菌的察氏培养基中央穿刺接种（倒置培养皿穿刺接种），30℃下培养7～10d，形成巨大菌落培养物。■直接制片：于洁净载玻片中央加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，打开霉菌平板培养物，用解针从菌落的边缘挑取少量带有孢子的菌丝，放入载玻片的染液中，细心地把菌丝挑散开，加盖玻片，注意不要产生气泡，置于显微镜下观察，菌丝呈兰色，颜色的深度随菌龄的增加而减弱
方法及操作 ◼ 点种培养：用接种针沾取斜面少许孢子在无菌的察氏 培养基中央穿刺接种（倒置培养皿穿刺接种），3０ ℃下培养7～10 d，形成巨大菌落培养物。 ◼ 直接制片：于洁净载玻片中央加一滴乳酸石炭酸棉蓝 染色液，打开霉菌平板培养物，用解剖针从菌落的边 缘挑取少量带有孢子的菌丝，放入载玻片的染液中， 细心地把菌丝挑散开，加盖玻片，注意不要产生气泡 ，置于显微镜下观察，菌丝呈兰色，颜色的深度随菌 龄的增加而减弱。 5