2、入噬菌体 >噬菌体基因组全长为49kb。 >噬菌体DNA中间约2/3的序列为中间 基因簇,位于两端的为DNA左和右 臂。 >中间基因簇可被外源DNA替代而不 影响感染细菌及形成噬菌斑的能力。 >噬菌体可接受15-23kb的外源DNA 入噬菌体载体 片段,可作为克隆载体和表达载体, 1.入猫菌体:2.入慰菌体DNA: 3.入莲菌体DNA中间基因簇: 广泛用于各类基因库的构建。 4.将连接物体外包装后感柔细菌, 制备基因库
2、λ噬菌体 λ噬菌体基因组全长为49 kb。 λ噬菌体DNA中间约2/3的序列为中间 基因簇,位于两端的为DNA左和右 臂。 中间基因簇可被外源DNA替代而不 影响感染细菌及形成噬菌斑的能力。 λ噬菌体可接受15-23 kb的外源DNA 片段,可作为克隆载体和表达载体, 广泛用于各类基因库的构建
3、柯斯质粒 >柯斯质粒(cosmid)是利用部分 噬菌体DNA与部分细菌质粒DNA 序列组建而成的。 Amp >柯斯质粒具有噬菌体c0s序列、 EcoR I pWE15 NotI 细菌质粒复制原点、抗生素抗性 8 048bps T3 mcs BamH I 标记基因。 neo r Tr SV4o ori >这种质粒分子量较小,但可接受 长达50kb的外源DNA片段,可克 柯斯质粒pE15 pE15具有单一c0s位点。在细菌中的氨苄青 隆真核生物基因。 霉素和真核生物中的新潮霉素抗性选择标记性状
3、柯斯质粒 柯斯质粒(cosmid)是利用部分λ 噬菌体DNA与部分细菌质粒DNA 序列组建而成的。 柯斯质粒具有λ噬菌体cos序列、 细菌质粒复制原点、抗生素抗性 标记基因。 这种质粒分子量较小,但可接受 长达50 kb的外源DNA片段,可克 隆真核生物基因
4、穿梭载体 >穿梭载体(shuttle vector):指能在两种不同生物中复制的 载体。如能在原核生物(如E.co)和真核细胞(如酵母)中 复制的载体。 >穿梭载体需具有细菌质粒复制原点及选择标记基因、真核生 物的自主复制序列(autonomously replicating sequence, ARS)以及选择标记性状。 >穿梭载体在细菌中用于克隆、扩增基因,在酵母中用于基因 表达分析
4、穿梭载体 穿梭载体(shuttle vector):指能在两种不同生物中复制的 载体。如能在原核生物(如E.coli)和真核细胞(如酵母)中 复制的载体。 穿梭载体需具有细菌质粒复制原点及选择标记基因、真核生 物的自主复制序列(autonomously replicating sequence, ARS)以及选择标记性状。 穿梭载体在细菌中用于克隆、扩增基因,在酵母中用于基因 表达分析
5、细菌人工染色体 >细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC): Sall Not 一般可携带大于50kb的外源DNA 片段。 parc >带有外源DNA的BAC载体在细胞 Cm 中通常是单拷贝的。 parB pBeloBAC11 7400bp > BAC载体本身分子量小,如 parA pBeloBAC1u全长7.4kb。 repE >BAC载体具有氯霉素抗性选择基因 细葡人工染色体pBeloBAC1i 及多克隆位点
5、细菌人工染色体 细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC): 一般可携带大于50 kb的外源DNA 片段。 带有外源DNA的BAC载体在细胞 中通常是单拷贝的。 BAC载体本身分子量小,如 pBeloBAC11全长7.4 kb。 BAC载体具有氯霉素抗性选择基因 及多克隆位点
6、酵母人工染色体 >酵母人工染色体(yeast artificial chromosome,YAC): 具有自主复制序列、克隆位点和可在细菌和酵母菌中选择 的标记基因 >YAC还具有酵母菌染色体一些特点, CEN4 EcoRI 可接受100-1000kb的外源DNA片段。 TRP ARS SUP4 >YAC已成为人类基因组计划和图位 Ampr PYAC4 克隆分离基因的重要工具。 URA3 11400bp ori >目前应用最多的YAC载体是pYAC4。 TEL His3 W BamHI BamHI
6、酵母人工染色体 酵母人工染色体(yeast artificial chromosome,YAC): 具有自主复制序列、克隆位点和可在细菌和酵母菌中选择 的标记基因 YAC还具有酵母菌染色体一些特点, 可接受100-1000 kb的外源DNA片段。 YAC已成为人类基因组计划和图位 克隆分离基因的重要工具。 目前应用最多的YAC载体是pYAC4