7、Ti质粒及其衍生载体 >把外源基因导入植物细胞的植物表达载体。 >T质粒是根癌农杆菌染色体外的遗传物质,为 双链共价闭合的环状DNA分子,其分子量为 T-DNA LB RB 95~156x106D,约有200~300kb。 plasmid transfer >T质粒具有5个主要功能区域:T-DNA、质粒 vir Ti 转移区、冠瘿碱代谢、复制原点和毒性区域。 opine catabolism >T质粒的衍生载体:双元载体和共整合载体
7、Ti质粒及其衍生载体 把外源基因导入植物细胞的植物表达载体。 Ti质粒是根癌农杆菌染色体外的遗传物质,为 双链共价闭合的环状DNA分子,其分子量为 95~156 x 106 D,约有200~300 kb。 Ti质粒具有5个主要功能区域:T-DNA、质粒 转移区、冠瘿碱代谢、复制原点和毒性区域。 Ti质粒的衍生载体:双元载体和共整合载体
四、基因的分离与鉴定 基因的分离与克隆方法: 基因文库技术 > 功能蛋白组技术 > 图位克隆法 mRNA差异显示法 转座子、T-DNA标签法 > 同源序列法 > 功能互补法 基因组扣除杂交法 酵母双杂交系统
四、基因的分离与鉴定 基因的分离与克隆方法: 基因文库技术 功能蛋白组技术 图位克隆法 mRNA差异显示法 转座子、T-DNA标签法 同源序列法 功能互补法 基因组扣除杂交法 酵母双杂交系统
1、从基因库中分离基因 >基因库(gene library):是一组DNA和cDNA序列克隆的集 合体。 >核基因库(genomic library):将某一生物的全部基因组 DNA酶切后与载体连接构建而成。 >染色体基因库:将基因组的一部分(如一条染色体)用来构建 基因库,对于选择特异基因及分析染色体结构和组织十分有价 值。 cDNA库:以mRNA为模板,经反转录酶合成互补DNA构建 的基因库
1、从基因库中分离基因 基因库(gene library) :是一组DNA和cDNA序列克隆的集 合体。 核基因库(genomic library):将某一生物的全部基因组 DNA酶切后与载体连接构建而成。 染色体基因库:将基因组的一部分(如一条染色体)用来构建 基因库,对于选择特异基因及分析染色体结构和组织十分有价 值。 cDNA库:以mRNA为模板,经反转录酶合成互补DNA构建 的基因库
1、从基因库中分离基因 步骤: >构建基因库 >1 筛选基因库 >阳性克隆的分析与鉴定 (1)限制性酶图谱 (2)核酸分子杂交 (3)核酸序列分析
1、从基因库中分离基因 步骤: 构建基因库 筛选基因库 阳性克隆的分析与鉴定 (1)限制性酶图谱 (2)核酸分子杂交 (3)核酸序列分析