二、限制性内切核酸酶 >限制性内切核酸酶(restriction endonucleases.):在DNA分子 内部的特异性的碱基序列部位进行切割，是一种水解DNA的 磷酸二脂酶，遗传工程中重要工具。 >限制性内切酶的命名原则：由分离出酶的微生物的属名第一个 字母和种名的前两个字母组成，如Eco(Esherichia coli)。 属名 种名 株名 序数 来源菌株 名称 (大写) (小写) EcoR I E co R I Escherichia coli R Hind III H in d Ⅲ Haemaphilus influenzae Hind II H in d II Haemaphilus influenzae Hind I H in d I Haemaphilus parainfluenzae
二、限制性内切核酸酶 限制性内切核酸酶（restriction endonucleases）：在DNA分子 内部的特异性的碱基序列部位进行切割，是一种水解DNA的 磷酸二脂酶，遗传工程中重要工具。 限制性内切酶的命名原则：由分离出酶的微生物的属名第一个 字母和种名的前两个字母组成，如Eco（Esherichia coli）。 名 称 属 名 (大写) 种 名 (小写） 株名 序数 来 源 菌 株 EcoR I E co R I Escherichia coli R Hind III H in d III Haemaphilus influenzae Hind II H in d II Haemaphilus influenzae Hind I H in d I Haemaphilus parainfluenzae
二、限制性内切核酸酶 Ⅱ型限制性内切核酸酶识别序列特点： >均有严格的识别特定核苷酸的序列。 >识别的核苷酸序列一般在4-8个碱基对，最常见的是4个或6个核苷酸， 少数也有识别5个核苷酸以及7个、9个、10个和11个核苷酸的。 >大多数识别位点具有180度旋转对称的结构形式。 ----GAATTC--- ----GGN NCC---- ----CTTAA G---- ----CCN NGG---- EcoR I Nlal V
二、限制性内切核酸酶 II型 限制性内切核酸酶识别序列特点： 均有严格的识别特定核苷酸的序列。 识别的核苷酸序列一般在4-8个碱基对，最常见的是4个或6个核苷酸， 少数也有识别5个核苷酸以及7个、9个、10个和11个核苷酸的。 大多数识别位点具有180度旋转对称的结构形式。 ----G AATTC---- ----CTTAA G---- ----GGN NCC---- ----CCN NGG---- EcoR I NlaI V
二、限制性内切核酸酶 切割产生平末端(blunt end),如SmaI; 切割产生粘性末端（sticky end),如BamH I。 a)Cut with Smal b)Cut with BamHI ...CCCGGG... ..GGGCCC.. 刻 5...GGATCC... CCTAGG..5 G Overhanging 5'GATCC...3' 8 ...CCTAG ("sticky") G.5 Blunt ends 5ends Sma I BamH I
二、限制性内切核酸酶 切割产生平末端（blunt end），如Sma I； 切割产生粘性末端（sticky end），如BamH I 。 Sma I BamH I
三、载体 >载体(vector):在基因工程操作中，常常把外源DNA片段 利用运载工具送入生物细胞。我们把携带外源基因进入受 体细胞的这种工具叫做载体。 >作为载体DNA分子需具备的条件： (1)具有复制原点（oi),能自我复制； (2)具多克隆位点(multiple cloningsite.,MCS),即有 多种限制性酶的切点； (3)具有选择标记基因； (4)易从宿主细胞中回收
三、载体 载体（vector）：在基因工程操作中，常常把外源DNA片段 利用运载工具送入生物细胞。我们把携带外源基因进入受 体细胞的这种工具叫做载体。 作为载体DNA分子需具备的条件： （1）具有复制原点（ori），能自我复制； （2）具多克隆位点（multiple cloningsite，MCS ），即有 多种限制性酶的切点； （3）具有选择标记基因； （4）易从宿主细胞中回收
三、载体 1、细菌质粒 >质粒(plasmid)：是细菌细胞内独立于细菌染色体而自然存在的、 能自我复制、易分离和导入的环状双链DNA分子。 >质粒的拷贝数是指某种质粒在一个细菌细胞内的数目。根据每个寄主 细胞中质粒拷贝数的多少，把质粒分为严紧型复制质粒（拷贝数少， 为1-5个)与松弛型复制质粒（拷贝数多，可达10-200个拷贝)。 大肠杆菌 Lac Z MCS pUC18/pUC19 2686bp 质粒 染色体 Ori 质粒的结构示意图 pUC18/pUC18
三、载体 1、细菌质粒 质粒（plasmid）：是细菌细胞内独立于细菌染色体而自然存在的、 能自我复制、易分离和导入的环状双链DNA分子。 质粒的拷贝数是指某种质粒在一个细菌细胞内的数目。根据每个寄主 细胞中质粒拷贝数的多少，把质粒分为严紧型复制质粒（拷贝数少， 为1-5个）与松弛型复制质粒（拷贝数多，可达10-200个拷贝）。 质粒 染色体 大肠杆菌 质粒的结构示意图 Ori Amp Lac Z r MCS Plac pUC18/ pUC18