加热使DNA变性是实验室最常用的方法，称为热变性，DNA热 变性发生在一个狭窄的温度范围内。通常将DNA变性达到50%时 (即增色效应达到一半时)的温度称为解链温度或熔解温度 (melting temperature）,用Tm表示。 退火(annealing):热变性DNA在缓慢冷却时，可以复性，这 种复性称为退火。 ● “淬火”（quench):将热变性的DNA骤然冷却时，DNA不 可能复性，这是由于温度突然降低，单链DNA分子失去碰撞的机 会，因而不能复性，仍然保持单链变性的状态。将热变性DNA骤 然冷却的处理过程叫“淬火”。 利用“淬火”的原理，在用同位素标记的双链DNA片段进行分子 杂交时，为获得单链的杂交探针，可将装有热变性DNA溶液的试 管直接插入冰浴，使溶液在冰浴中骤然冷却至0°℃。 6
6 ⚫ 加热使DNA变性是实验室最常用的方法，称为热变性，DNA热 变性发生在一个狭窄的温度范围内。通常将DNA变性达到50%时 （即增色效应达到一半时）的温度称为解链温度或熔解温度 （melting temperature），用Tm表示。 ⚫ 退火（annealing）：热变性DNA 在缓慢冷却时，可以复性，这 种复性称为退火。 ⚫ “淬火”（quench）：将热变性的DNA 骤然冷却时，DNA不 可能复性，这是由于温度突然降低，单链DNA 分子失去碰撞的机 会，因而不能复性，仍然保持单链变性的状态。将热变性DNA骤 然冷却的处理过程叫“淬火” 。 ⚫ 利用“淬火”的原理，在用同位素标记的双链DNA片段进行分子 杂交时，为获得单链的杂交探针，可将装有热变性DNA 溶液的试 管直接插入冰浴，使溶液在冰浴中骤然冷却至0℃
核酸分子杂交的基本原理 ·根据核酸变性和复性的原理，不同来 八入N不NN Denature DNA Denature DNA 源的DNA变性后，若这些异源DNA and adsorb to filter in solution 之间存在某些相同序列的区域，在退 火条件下则可形成DNA-DNA异源双 链；或将变性的单链DNA与RNA经 Dip filter in solution 复性处理可以形成DNA-RNA杂合双 链。这种不同来源的单链核酸分子在 合适的条件下，通过碱基互补形成双 Measure DNA bound to filter 链杂交体的过程称为核酸分子杂交 molecular hybridization ) 八八
7 核酸分子杂交的基本原理 ⚫ 根据核酸变性和复性的原理，不同来 源的DNA变性后，若这些异源DNA 之间存在某些相同序列的区域，在退 火条件下则可形成DNA-DNA异源双 链；或将变性的单链DNA与RNA经 复性处理可以形成DNA-RNA杂合双 链。这种不同来源的单链核酸分子在 合适的条件下，通过碱基互补形成双 链杂交体的过程称为核酸分子杂交 （molecular hybridization）
第一节基因诊断技术 礼DA 探针DA ↓限制性内切酶消化 凝弱性标己 琼脂糖电泳 泳动 加热变性 大分子量 小分子量 碱变性 昪猪整 克限赛熟 转移DNA 印迹杂交So 到膜上 洗版多余探针 放射自显影 压片
8 第一节 基 因 诊 断 技 术 Southern 印 迹 杂 交
基因诊断技术 A or za印迹杂交 A月日 labeled
9 基 因 诊 断 技 术 Northern 印迹杂交
基因诊断技术 97779 点样 8888 Probe-32P B888 检测 斑点杂交 B 88881 3
10 基 因 诊 断 技 术 斑 点 杂 交 点样 Probe- 32P 检测 A B 1 2 3 4