Resdingframe1 5-UU CUC G C A CC U GG A G A UU C A C A G U Reading frame 2 -UUCUCGGACCUGGAGAUUCACAGU Resding frame3 -UUCUCGGACC UGG AG A UU C A C A GU figure 27-5 na tiplonvering cde all mRNAs have three potentil reading frames shaoed here n dieren colors Note that he tpie地nd hence the amino8C体s0+ ned,ave difterent in och tooing frame
▪ 实验3: 以均聚物为模板指导多肽的合成。 在含有tRNA、核糖体、 AA-tRNA合成酶及其它蛋白质因子的细胞抽提物中加入 mRNA或人工合成的均聚物作为模板以及ATP、GTP、氨基 酸等成分时又能合成新的肽链,新生肽链的氨基酸顺序由外 加的模板来决定。 1961年,Nirenberg等以poly(U)作模板时发现合成了多 聚苯丙氨酸,从而推出UUU代表苯丙氨酸(Phe)。以poly (C)及poly(A)做模板分别得到多聚脯氨酸和多聚赖氨酸。 ▪ 实验4: 以特定序列的共聚物为模板指导多肽的合成。以多聚二核 苷酸作模板可合成由2个氨基酸组成的多肽, 5'.UGU GUG UGU GUG UGU GUG.3',不管读码从U开 始还是从G开始,都只能有UGU(Cys)及GUG(Val)两 种密码子
▪ 实验3: 以均聚物为模板指导多肽的合成。 在含有tRNA、核糖体、 AA-tRNA合成酶及其它蛋白质因子的细胞抽提物中加入 mRNA或人工合成的均聚物作为模板以及ATP、GTP、氨基 酸等成分时又能合成新的肽链,新生肽链的氨基酸顺序由外 加的模板来决定。 1961年,Nirenberg等以poly(U)作模板时发现合成了多 聚苯丙氨酸,从而推出UUU代表苯丙氨酸(Phe)。以poly (C)及poly(A)做模板分别得到多聚脯氨酸和多聚赖氨酸。 ▪ 实验4: 以特定序列的共聚物为模板指导多肽的合成。以多聚二核 苷酸作模板可合成由2个氨基酸组成的多肽, 5'.UGU GUG UGU GUG UGU GUG.3',不管读码从U开 始还是从G开始,都只能有UGU(Cys)及GUG(Val)两 种密码子
▪ 实验5: 以共聚三核苷酸作为模板可得到有3种氨基酸组 成的多肽。如以多聚(UUC)为模板,可能有3种 起读方式: 5’.UUC UUC UUC UUC UUC.3’或 5’.UCU UCU UCU UCU UCU.3’或 5'.CUU CUU CUU CUU CUU.3'分别产生UUC(Phe)、UCU(Ser) 或CUU(Leu). 多聚三核苷酸为模板时也可能只合成2种多肽: 5’.GUA GUA GUA GUA GUA.3’或5’.UAG UAG UAG UAG UAG.3’ 或5’.AGU AGU AGU AGU AGU.3’由第二种读码 方式产生的密码子UAG是终止密码,不编码任何氨 基酸,因此,只产生GUA(Val)或AGU(Ser)
▪ 实验5: 以共聚三核苷酸作为模板可得到有3种氨基酸组 成的多肽。如以多聚(UUC)为模板,可能有3种 起读方式: 5’.UUC UUC UUC UUC UUC.3’或 5’.UCU UCU UCU UCU UCU.3’或 5'.CUU CUU CUU CUU CUU.3'分别产生UUC(Phe)、UCU(Ser) 或CUU(Leu). 多聚三核苷酸为模板时也可能只合成2种多肽: 5’.GUA GUA GUA GUA GUA.3’或5’.UAG UAG UAG UAG UAG.3’ 或5’.AGU AGU AGU AGU AGU.3’由第二种读码 方式产生的密码子UAG是终止密码,不编码任何氨 基酸,因此,只产生GUA(Val)或AGU(Ser)
▪ 实验6: 以随机多聚物指导多肽合成。Nirenberg等 及Ochoa等又用各种随机的多聚物作模板合 成多肽。例如,以只含A、C的多聚核苷酸作 模板,任意排列时可出现8种三联子,即 CCC、CCA、CAC、ACC、CAA、ACA、 AAC、AAA,获得由Asn、His、Pro、Gln、 Thr、Lys等6种氨基酸组成的多肽
▪ 实验6: 以随机多聚物指导多肽合成。Nirenberg等 及Ochoa等又用各种随机的多聚物作模板合 成多肽。例如,以只含A、C的多聚核苷酸作 模板,任意排列时可出现8种三联子,即 CCC、CCA、CAC、ACC、CAA、ACA、 AAC、AAA,获得由Asn、His、Pro、Gln、 Thr、Lys等6种氨基酸组成的多肽
▪ (3)氨基酸的“活化”与核糖体结合技术。 如果把氨基酸与ATP和肝脏细胞质共培养,氨 基酸就会被固定在某些热稳定且可溶性RNA分子 (transfer RNA,tRNA)上。现将氨基酸活化后的 产物称为氨基酰-tRNA(aminoacyl-tRNA),并把 催化该过程的酶称为氨基酰合成酶(aminoacyltRNA Synthetase)。 以人工合成的三核苷酸如UUU、UCU、UGU 等为模板,在含核糖体、AA-tRNA的反应液中保温 后通过硝酸纤维素滤膜,只有游离的AA-tRNA因相 对分子质量小而通过滤膜,而核糖体或与核糖体结 合的AA-tRNA则留在滤膜上,这样可把已结合与未 结合的AA-tRNA分开
▪ (3)氨基酸的“活化”与核糖体结合技术。 如果把氨基酸与ATP和肝脏细胞质共培养,氨 基酸就会被固定在某些热稳定且可溶性RNA分子 (transfer RNA,tRNA)上。现将氨基酸活化后的 产物称为氨基酰-tRNA(aminoacyl-tRNA),并把 催化该过程的酶称为氨基酰合成酶(aminoacyltRNA Synthetase)。 以人工合成的三核苷酸如UUU、UCU、UGU 等为模板,在含核糖体、AA-tRNA的反应液中保温 后通过硝酸纤维素滤膜,只有游离的AA-tRNA因相 对分子质量小而通过滤膜,而核糖体或与核糖体结 合的AA-tRNA则留在滤膜上,这样可把已结合与未 结合的AA-tRNA分开