Ⅱ型酶 1970年，H.O.Smith和K.W.Wilcox在流感嗜 血Rd株中分离出来的限制酶。 分子量较小（105Da），只有一种多肽， 通常以同源二聚体的形式存在。反应只需 Mg++的存在，并且具有以下两个特点，使这 类酶在基因工程研究中，得到广泛的应用。 • 识别位点是一个回文对称结构，并且切割位 点也在这一回文对称结构上。 • 许多Ⅱ型酶切割ＤＮＡ后，可在ＤＮＡ上形 成粘性末端，有利于ＤＮＡ片段的重组
Ⅱ型酶 1970年，H.O.Smith和K.W.Wilcox在流感嗜 血Rd株中分离出来的限制酶。 分子量较小（105Da），只有一种多肽， 通常以同源二聚体的形式存在。反应只需 Mg++的存在，并且具有以下两个特点，使这 类酶在基因工程研究中，得到广泛的应用。 • 识别位点是一个回文对称结构，并且切割位 点也在这一回文对称结构上。 • 许多Ⅱ型酶切割ＤＮＡ后，可在ＤＮＡ上形 成粘性末端，有利于ＤＮＡ片段的重组
Ⅲ型酶 这类酶可识别特定碱基顺序，并 在这一顺序的3’端24~26bp处切开 ＤＮＡ，所以它的切割位点也是没 有特异性的
Ⅲ型酶 这类酶可识别特定碱基顺序，并 在这一顺序的3’端24~26bp处切开 ＤＮＡ，所以它的切割位点也是没 有特异性的
Ⅱ型酶的基本特性 1. 在DNA双链的特异性识别序列部位， 切割DNA分子，产生链的断裂。 2. 两个单链断裂部位在DNA分子上的分 布，通常不是彼此直接相对的 3. 因此，断裂的结果形成的DNA片断， 也往往具有互补的单链延伸末端
Ⅱ型酶的基本特性 1. 在DNA双链的特异性识别序列部位， 切割DNA分子，产生链的断裂。 2. 两个单链断裂部位在DNA分子上的分 布，通常不是彼此直接相对的 3. 因此，断裂的结果形成的DNA片断， 也往往具有互补的单链延伸末端
核酸内切酶作用后的断裂方式 粘性末端 ：两条链上的断裂位置是交错地、但又是 围绕着一个对称结构中心，这样形式的断裂结果形 成具有粘性末端的DNA片断。 具有3’-OH（ Pst1 ），或5’-OH(EcoR1)的粘性末端。 Pst1 EcoR1 5’CTGCAG 3’ 5’GAATTC 3’ 3’GACGTC 5’ 3’CTTAAG 5’
核酸内切酶作用后的断裂方式 粘性末端 ：两条链上的断裂位置是交错地、但又是 围绕着一个对称结构中心，这样形式的断裂结果形 成具有粘性末端的DNA片断。 具有3’-OH（ Pst1 ），或5’-OH(EcoR1)的粘性末端。 Pst1 EcoR1 5’CTGCAG 3’ 5’GAATTC 3’ 3’GACGTC 5’ 3’CTTAAG 5’
平末端 两条链上的断裂位置是处在一个 对称结构的中心这样形式的断裂是 形成具有平末端的DNA片断。不易 重新环化
平末端 两条链上的断裂位置是处在一个 对称结构的中心这样形式的断裂是 形成具有平末端的DNA片断。不易 重新环化