基因检测在感染性疾病一、7中的应用
一、基因检测在感染性疾病 中的应用
SARS相关冠状病毒的分子诊断2003年4月，香港研究者Peiris等报告了50例SARS病人的临床表现和病毒学研究结果(Coronavirus）是SARS的一种新的冠状病毒致病原因(Lancet,2003,361:9365)
SARS相关冠状病毒的分子诊断 ◼ 2003年4月，香港研究者Peiris等报告了50 例 SARS病人的临床表现和病毒学研究结果。 ◼ 一种新的冠状病毒 (Coronavirus) 是SARS 的 致病原因。 (Lancet, 2003, 361: 9365)
，2003年4月，德国汉堡Bernhard-Nocht热带医学研究所学者Drosten等用随机扩增技术，获得一段长度为300bp的核苷酸序列。，根据这段序列，建立了检测新冠状病毒的常规和实时定量PCR技术www.nejm.com.org on April 10,2003)
▪ 2003年4月，德国汉堡Bernhard-Nocht热带医 学研究所学者Drosten等用随机扩增技术，获 得一段长度为300bp的核苷酸序列。 ▪ 根据这段序列，建立了检测新冠状病毒的常 规和实时定量PCR技术。 www.nejm.com.org on April 10, 2003）
ABNI-2CDCBNI-190nt300nt400nt31028orf lab4.9kDNSorflaHE→4.8kDNS.-NE-5'UTRNS-S++N12.7kDNS+M→3'UTR-BBNITMSI+-Nudleotide sequencesBNloutS2BNinS-406070801020305090100BNI-1CGTCACOTTCTACCOTAGACTCATCTCTATGATOGGTTTCAAATGAATTACCAAGTCAATOGTTACCCTAATATGTTTATCACCCOCGAAGAGCTATTBovine-CV.TTCA...TH.A..A..AC.C......T...c..a..aTTACCC,Ta....a..ra...oc.T.....A..TAA.......a..Aa.a...o.Avian-IBV.TAAACAT.S.T..T.O.C.LT.A.A.IS..a....a.aTTA.T..TO.A..C.a..AC.c...A..A..T..T..a..A..C.CA.T..AAMurine-HV..coc.a.T..A..AC.C....A...TaACCC.Ta......TrO.T....cAAA.GT..A..ac.ta.c...oc...A..TA.A.Porcine-TGEV.TOC..ATO.....ATAT.....A....aOrrO.AaC.A,CA.ACCA..C..T.AC.CAC.A..CTa...a..A..TTTT.....GT..A.T..AHuman-CV-229E.TAACATG.G..T..ATAT..........oa.r..aTTAOCA.OCC....AGT.A..a.T....crcrr..c..a..-.T..CAGT..TA.A..Porcine-EDV.TOAGCATG.T....OT,T..COTT,TO..ATTA.CA.ACCCAACC..AC.c.c.c...rG..A...CTTT..C..O.CA.T...A+....BNITMPBNITMAsZ.→.BNlinAs110120130140150160170180190200BNI-1GTGCGTOGATTCOCTTTGATGTCATGCAACTAGAGATGCTTTTTCTACAGGTGTTAACTTGTAGAOGGCTGTGGGTACTAACCTACCTCTCCAGCTAOGABovine-CV.CT..A..TOOC.T...AaCA.T..G..A..TT.C..A..T..AT....G.....C.....AA..O.T......T.....C......c....Avian-IBV.....A.CAACA.....TT.a.CAC.AACT..AO....T.A.GT...G.A..T.A.T.1......G...T...C.....T...CAG........Murine-HV.C...A..Tace.....a.A..AT....C.A..c...a...C...AC.T...AGCA.T..G..A..TT.C..AT.....a..r..AA...T.......Poreine-TGEV..T..A..TCA...TCTOA.....G..TA..A..C....a.....c.a.T....B.T..A...TO..AT...C..A.AC.....o0.T..Human-CV-229E..a..A..TaCA....TC....C.AT..A.OT...T.A..AA.G...AG.T..CAA...T..C.....TO......A..AO.T..T.....a.T..Porcine-EDVCA....TTOT.a.cTc.AcA.GT...T.a..T.....c..T..A..Aa..C....A..TO.C..AT.a..aT....a..AC......G.T..+BNloutAs210220230240250260270280290300BNI-1COGACTOGTTAGTAGCTGTAATGTTGACACTGAAAATAACACAGAATTCACCAGAGTTAATGCAAAACCTCCAOCAGGTGACCAGTTTAAACATCTTATABovine-CVT..T.TG.A.G.C...TOT...CTGA.AG.G..GGTTACAGC..T.AA.AG.C.GTG..T...G...T..T.....A..A.....G.....C..cAvian-IBVT...-TCAOG..TGAO..ACT...A..T...TC..TAGG..ATA.T..TOAOCCT..G...T.T...G.A..T.......C..CT.G.G..A.A....Murine-HVT,.T.TC.A.G.C....AATGT...CTGAGAG,G..GGTTAT.TO..T.AA.AG.CAGCC...co.G....T..T..C..A..A........C.....Porcine-TGEV....AGGTT....TGCA.A.TGAA..A.G....ATT...ATAGCA-TGAGGTT.A..A...CG.G.A.0..A...0C...CT.G..T...Human-CV-229ET......CA..TGAA....G....CTA..AA.C.C.GG..GT,TTG.A.AACCT...CG..TCOTG.A.+.T..A..A..A..C.CT..CA..G..Porcine-EDVT.-T.TCAG.W.GTC.GGTAACCC..C.G.A..A..COC...C...T.G..TGAA...GC....TA..GACT.CA.T.A..TCOTG.....o
检测标本痰液、咽拭子、鼻拭子、支气管肺泡灌洗液血浆、粪便。检测方法1．逆转录-巢式PCR(Reverse-Nested PCR)2．逆转录-实时PCR(Reverse-Real time PCR
◼ 检测标本 痰液、咽拭子、鼻拭子、支气管肺泡灌洗液 、 血浆、粪便。 ◼ 检测方法 1. 逆转录-巢式PCR (Reverse-Nested PCR) 2. 逆转录-实时PCR (Reverse-Real time PCR)