五、数据处理1.以吸收光度值为纵坐标，铬含量为横坐标制作标准曲线。2.从标准曲线中，由血清试样的吸光度查出相应的铬含量。3.计算血清中铬的含量（ug/mL)。六、注意事项1.实验前应仔细了解仪器的构造及操作，以便实验能顺利进行。2.实验前应检查通风是否良好，确保试样中产生的废气排出室外。3.注意用气用电安全，要严格按教师指导进行实验。思考题1.非火焰原子吸收光谱法具有哪些特点？2.在实验中通Ar气的作用是什么？为什么要用Ar气？3.配制标准溶液时，加入葡聚糖溶液的作用是什么？若不加葡聚糖溶液，还可采用什么方法？11
五、数据处理 1. 以吸收光度值为纵坐标，铬含量为横坐标制作标准曲线。 2. 从标准曲线中，由血清试样的吸光度查出相应的铬含量。 3. 计算血清中铬的含量（ μg /mL）。 六、注意事项 1. 实验前应仔细了解仪器的构造及操作，以便实验能顺利进行。 2. 实验前应检查通风是否良好，确保试样中产生的废气排出室外。 3. 注意用气用电安全，要严格按教师指导进行实验。 思考题 1.非火焰原子吸收光谱法具有哪些特点？ 2.在实验中通 Ar 气的作用是什么？为什么要用 Ar 气？ 3. 配制标准溶液时，加入葡聚糖溶液的作用是什么？若不加葡聚糖溶液，还可采用什么方 法？ 11
紫外一一可见分光光度法实验一五八72型分光光度计单色器的装配与调试一、实验自的1.72型分光光度计是一种结构简单、直观的光学仪器。通过对单色器的装配与调试，使学生进一步了解光学仪器的原理与构造，熟悉、掌握仪器的装配和调校方法。2.使学生能独立按照仪器说明书安装、调试所使用的72型分光光度计。二、方法原理72型分光光度计是根据朗伯—比尔定律设计的可见光范围的分光光度计。其基本原理是基于物质分子对光的选择性吸收。当一束平行单色光（Io）通过有色溶液时，光的一部分被吸收，一部分透过溶液（I）。不同物质的溶液对光的吸收程度与其浓度（c）、液层厚度（b）及入射光的波长等因素有关。当入射光波长一定时，朗伯一比尔定律用数学表达式可以写成：A=Ig' =abcSI式中，A为吸光度：a为比例常数，它与入射光波长，物质的性质和溶液的温度等因素有关，称为吸光系数。?1YAR图158-172型分光光度计光学系统1---光源2—进光狭缝3一反射镜I4—透镜5棱镜6一反射镜7透镜8—出光狭缝9—比色皿10—光量调节器11—光电池12—微电计72型分光光度计，由稳压器、单色器、高灵敏度光点反射检流计3个部件组成，其光路如图158-1所示，它以10V、7.5A钨丝灯泡为光源，用分光能力强的棱镜将入射的白光色散成波长范围很窄的各种单色光，并被透镜聚光在出射狭缝上，比色皿装于出射狭缝的后面。通12
紫外-可见分光光度法 实验一五八 72 型分光光度计单色器的装配与调试 一、实验目的 1. 72 型分光光度计是一种结构简单、直观的光学仪器。通过对单色器的装配与调试，使 学生进一步了解光学仪器的原理与构造，熟悉、掌握仪器的装配和调校方法。 2. 使学生能独立按照仪器说明书安装、调试所使用的 72 型分光光度计。 二、方法原理 72 型分光光度计是根据朗伯——比尔定律设计的可见光范围的分光光度计。其基本原理 是基于物质分子对光的选择性吸收。当一束平行单色光（I0）通过有色溶液时，光的一部分被 吸收，一部分透过溶液（I）。不同物质的溶液对光的吸收程度与其浓度（c）、液层厚度（b） 及入射光的波长等因素有关。当入射光波长一定时，朗伯一比尔定律用数学表达式可以写成： abc I I A == 0 lg 式中，A 为吸光度；a 为比例常数，它与入射光波长，物质的性质和溶液的温度等因素有关， 称为吸光系数。 图 158-1 72 型分光光度计光学系统 1-光源 2—进光狭缝 3—反射镜 I 4—透镜 5—棱镜 6—反射镜 II 7—透镜 8—出光狭缝 9—比色皿 10—光量调节器 11—光电池 12—微电计 72 型分光光度计，由稳压器、单色器、高灵敏度光点反射检流计 3 个部件组成，其光路 如图 158-1 所示，它以 10V、7.5A 钨丝灯泡为光源，用分光能力强的棱镜将入射的白光色散 成波长范围很窄的各种单色光，并被透镜聚光在出射狭缝上，比色皿装于出射狭缝的后面。通 12
过盛有被测溶液比色皿的单色光最后入射到硒光电池上，经其转换，将光能转换为光电流，由光点反射检流计作为仪器的读数指示器。三、仪器和试剂仪器72型分光光度计：配套的磁饱和稳压器：检流计：反射镜1（带有支架，装在光源之后，棱镜之前）；反射镜II（带有固定支架）；单色器合（盒内除光学器件外、狭缝、光量调节器等所有机械器件均应完好无缺）：硒光电池：10V（7.5A）钨丝灯炮：比色皿：错钕滤光片；工具。试剂：0.004%左右KMnO溶液四、实验步骤1、把单色器翻转放于台桌上，拆下底板和单色器内部的暗盒盖板（唯一的一块正方形盖板）。2、按光路图把反射镜I装在光源后面的镜座上，用螺钉稍加固定。3、将棱镜安装在镜座上，用螺钉稍加固定。4、将反射镜I安装在波长调节器转盘上的镜座处，稍加固定。5、用细软的绸布或镜头纸轻轻擦净每个光学元件的透光面（注意切勿用手指接触镀铝反射镜的表面）。6、将硒光电池固定在电池座上，固定好引出线。7、卸下光源部分的金属罩，装上灯泡，再装上金属罩。8、校对波长①把波长刻度准确调到580nm的读数处，旋转光亮调节把光门全部打开，将暗盒盖板盖上（不要固定）。②在硒光电池前面插入一张白色硬纸片。③接通电源，灯泡亮，调节两个反射镜，使其射出的光平行的到达透镜的中心位置。慢慢移动棱镜的位置，直至在白色纸片上出现黄色的单色光为止。③小心地把所有光学元件的螺钉旋紧。③重新装上并固定暗盒盖板和单色器底板。9、用基准物质和标准滤光片重新核对仪器的波长①以蒸馏水为参比，测定0.004%KMnO溶液的吸收曲线，测量范围从450-570nm间，每隔5nm测量一次吸光度。在峰值附近，每隔2nm测量一次，其最大吸收波长应在523nm和544nm。②测定标准错钕滤光片的吸收曲线，波长范围从550-620nm，方法同上。如波长不准确应重新调整光学部件的位置。13
过盛有被测溶液比色皿的单色光最后入射到硒光电池上，经其转换，将光能转换为光电流，由 光点反射检流计作为仪器的读数指示器。 三、仪器和试剂 仪器 72 型分光光度计：配套的磁饱和稳压器；检流计；反射镜 I（带有支架，装在光源 之后，棱镜之前）；反射镜 II（带有固定支架）；单色器合（盒内除光学器件外、狭缝、光量调 节器等所有机械器件均应完好无缺）；硒光电池；10V（7.5A）钨丝灯炮；比色皿；镨钕滤光 片；工具。 试剂：0.004%左右KMnO4溶液 四、实验步骤 1、把单色器翻转放于台桌上，拆下底板和单色器内部的暗盒盖板（唯一的一块正方形盖 板）。 2、按光路图把反射镜 I 装在光源后面的镜座上，用螺钉稍加固定。 3、将棱镜安装在镜座上，用螺钉稍加固定。 4、将反射镜 II 安装在波长调节器转盘上的镜座处，稍加固定。 5、用细软的绸布或镜头纸轻轻擦净每个光学元件的透光面（注意切勿用手指接触镀铝反 射镜的表面）。 6、将硒光电池固定在电池座上，固定好引出线。 7、卸下光源部分的金属罩，装上灯泡，再装上金属罩。 8、校对波长 ① 把波长刻度准确调到 580nm 的读数处，旋转光亮调节把光门全部打开，将暗盒盖板盖 上（不要固定）。 ② 在硒光电池前面插入一张白色硬纸片。 ③ 接通电源，灯泡亮，调节两个反射镜，使其射出的光平行的到达透镜的中心位置。 ④ 慢慢移动棱镜的位置，直至在白色纸片上出现黄色的单色光为止。 ⑤ 小心地把所有光学元件的螺钉旋紧。 ⑥ 重新装上并固定暗盒盖板和单色器底板。 9、用基准物质和标准滤光片重新核对仪器的波长： ① 以蒸馏水为参比，测定 0.004%KMnO4溶液的吸收曲线，测量范围从 450-570nm间，每 隔 5nm测量一次吸光度。在峰值附近，每隔 2nm测量一次，其最大吸收波长应在 523nm和 544nm。 ② 测定标准镨钕滤光片的吸收曲线，波长范围从 550-620nm，方法同上。 如波长不准确,应重新调整光学部件的位置。 13
五、数据处理绘制吸收曲线以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制KMnO4溶液和错钕滤光片的吸收曲线，确定最大吸收波长。思考题1.对光学元件为什么要细心保护？2.分光光度计的波长为什么要定期进行校正？实验一五九紫外吸收光谱法测定APC片剂中乙酰水杨酸的含量一、实验目的1.了解7500型紫外一可见分光光度计的性能、结构及其使用方法，2.掌握紫外一可见分光光度法定量分析的基本原理和实验技术。二、方法原理APC药片，研磨成粉末，用稀NaOH水溶液溶解提取，乙酰水杨酸水解成水杨酸钠进入水溶液，该提取液在295nm左右有一个吸收峰，测出稀释成一定浓度的提取液的吸光度值，并用已知浓度的水杨酸的NaOH水溶液做出一条标准曲线，则可从标准曲线上求出相当于乙酰水杨酸的含量。根据两者的分子量，即可求得APC中乙酰水杨酸的含量。溶剂和其它成分不干扰测定。COOCH3COOOH+CHsOCOOHO180.15乙酰水杨酸浓度=[水杨酸浓度]X138.12三、仪器和试剂仪器天美7500或岛津240紫外一可见分光光度计：3G玻璃砂芯漏斗1个：抽滤瓶250ml1个：容量瓶250mL1支：50mL7支：胖肚吸量管20mL1只：刻度吸量管5mL2只。试剂0.5000mg/mL水杨酸贮备液：称取0.5000g水杨酸先溶于少量0.10moL/LNa0H溶液中，然后用蒸馏水定容于1000mL容量瓶中；0.10moL/LNaOH溶液。14
五、数据处理 绘制吸收曲线 以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制KMnO4溶液和镨钕滤光片的吸 收曲线，确定最大吸收波长。 思考题 1.对光学元件为什么要细心保护？ 2.分光光度计的波长为什么要定期进行校正？ 实验一五九 紫外吸收光谱法测定 APC 片剂中乙酰水杨酸的含量 一、实验目的 1. 了解 7500 型紫外－可见分光光度计的性能、结构及其使用方法。 2. 掌握紫外－可见分光光度法定量分析的基本原理和实验技术。 二、方法原理 APC 药片，研磨成粉末，用稀 NaOH 水溶液溶解提取，乙酰水杨酸水解成水杨酸钠进入水 溶液，该提取液在 295nm 左右有一个吸收峰，测出稀释成一定浓度的提取液的吸光度值，并 用已知浓度的水杨酸的 NaOH 水溶液做出一条标准曲线，则可从标准曲线上求出相当于乙酰水 杨酸的含量。根据两者的分子量，即可求得 APC 中乙酰水杨酸的含量。溶剂和其它成分不干 扰测定。 乙酰水杨酸浓度=[水杨酸浓度]× 12.138 15.180 三、仪器和试剂 仪器 天美 7500 或岛津 240 紫外—可见分光光度计；3G 玻璃砂芯漏斗 1 个；抽滤瓶 250mL 1 个；容量瓶 250mL 1 支；50mL 7 支；胖肚吸量管 20mL 1 只；刻度吸量管 5mL 2 只。 试剂 0.5000mg/mL 水杨酸贮备液：称取 0.5000g 水杨酸先溶于少量 0.10moL/L NaOH 溶 液中，然后用蒸馏水定容于 1000mL 容量瓶中；0.10moL/L NaOH 溶液。 14
四、实验内容将七个50mL容量瓶按0-6依次编号。分别移取水杨酸储备液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL于相应编号容量瓶中，各加入1.0mL0.10moL/LNa0H溶液，先用蒸馏水稀释至30mL左右，80℃水浴加热10分钟，冷却至室温，稀释至刻度，摇匀。放一片APC药片在清洁的50mL烧杯中，加2.OmL0.10moL/LNaOH先溶胀，再用玻棒搅拌溶解。在玻璃砂芯漏斗中先放入一张滤纸，用玻璃砂芯漏斗定量地转移烧杯中的内含物，用10m的0.1MNa0H淋洗烧杯和玻璃砂芯漏斗2次（共20mL），20mL蒸馏水淋洗漏斗4次（共80mL），并将滤液收集于同一个250mL容量瓶中，最后用蒸馏水稀释至刻度，摇勾。从250mL容量瓶中取20.0mLAPC溶液至一个50mL容量瓶中，蒸馏水稀释至30mL左右，80℃水浴加热10分钟，冷却至室温，稀释至刻度，摇匀。在紫外分光光度计上对标样3进行扫描，波长范围是320—280nm，找出最大吸收波长并在该波长下由低浓度到高浓度测定标准溶液的吸光度，最后测定未知液的吸光度。五、数据处理1.以吸光度A为纵坐标，水杨酸浓度C为横坐标作标准曲线。2.根据APC溶液的吸光度值，在标准曲线上求出相应的浓度（mg/mL），并换算成乙酰水杨酸的浓度。3.根据稀释关系，求出1片APC中乙酰水杨酸的含量，与制造药厂所标明的含量（25mg）进行比较，计算误差。六、注意事项1：配制样品前要将所使用的玻璃仪器用自来水冲洗，再用少量蒸馏水润洗。2.取标准溶液时，应先倒少量标准溶液于小烧杯中移取，不要直接将移液管伸入标准液试剂瓶中。移取标准溶液之前要润洗移液管。3.药片需充分溶胀后，再碾碎。4.水浴加热时容量瓶塞子要松松塞住，防止加热气体膨胀，塞子冲出。5.测量前用待测液润洗比色皿，测量由低浓度到高浓度依次进行。6.从实验步骤可知，试样是两次稀释后，用很稀的浓度进行吸光度测试的，因此提取和各步转移必须严格定量，制作标准曲线的标样浓度也必须很准确，不然就会使求得的试样浓度产生较大的误差，而乘上稀释体积后，所求的药片含量误差会更大。思考题1.实验中为什么要加热？2.引起误差的因素有哪些？如何减少误差？15
四、实验内容 将七个 50mL 容量瓶按 0-6 依次编号。分别移取水杨酸储备液 0.00、1.00、2.00、3.00、 4.00、5.00mL 于相应编号容量瓶中，各加入 1.0mL 0.10moL/L NaOH 溶液，先用蒸馏水稀释至 30mL 左右，80℃水浴加热 10 分钟，冷却至室温，稀释至刻度，摇匀。 放一片 APC 药片在清洁的 50mL 烧杯中，加 2.0mL0.10moL/L NaOH 先溶胀,再用玻棒搅拌溶 解。在玻璃砂芯漏斗中先放入一张滤纸，用玻璃砂芯漏斗定量地转移烧杯中的内含物，用 10mL 的 0.1MNaOH 淋洗烧杯和玻璃砂芯漏斗 2 次(共 20mL)，20mL 蒸馏水淋洗漏斗 4 次(共 80mL)， 并将滤液收集于同一个 250mL 容量瓶中，最后用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。 从 250mL 容量瓶中取 20.0mLAPC 溶液至一个 50mL 容量瓶中，蒸馏水稀释至 30mL 左右，80 ℃水浴加热 10 分钟，冷却至室温，稀释至刻度，摇匀。 在紫外分光光度计上对标样 3 进行扫描，波长范围是 320—280nm，找出最大吸收波长， 并在该波长下由低浓度到高浓度测定标准溶液的吸光度，最后测定未知液的吸光度。 五、数据处理 1. 以吸光度 A 为纵坐标，水杨酸浓度 C 为横坐标作标准曲线。 2. 根据 APC 溶液的吸光度值，在标准曲线上求出相应的浓度（mg/mL），并换算成乙酰水 杨酸的浓度。 3. 根据稀释关系，求出 1 片 APC 中乙酰水杨酸的含量，与制造药厂所标明的含量（25mg） 进行比较，计算误差。 六、注意事项 1. 配制样品前要将所使用的玻璃仪器用自来水冲洗，再用少量蒸馏水润洗。 2. 取标准溶液时，应先倒少量标准溶液于小烧杯中移取，不要直接将移液管伸入标准液 试剂瓶中。移取标准溶液之前要润洗移液管。 3. 药片需充分溶胀后，再碾碎。 4. 水浴加热时容量瓶塞子要松松塞住，防止加热气体膨胀，塞子冲出。 5. 测量前用待测液润洗比色皿，测量由低浓度到高浓度依次进行。 6. 从实验步骤可知，试样是两次稀释后，用很稀的浓度进行吸光度测试的，因此提取和 各步转移必须严格定量，制作标准曲线的标样浓度也必须很准确，不然就会使求得的试样浓度 产生较大的误差，而乘上稀释体积后，所求的药片含量误差会更大。 思考题 1. 实验中为什么要加热？ 2. 引起误差的因素有哪些？如何减少误差？ 15