5.1重组DNA技术发展史重组DNA技术的基本步骤①且的基因的获得与载体的制备②目的基因与载体DNA的连接③重组DNA分子导入受体细胞④重组体的筛选与重组DNA的鉴定③克降基因的表达及表达产物的检测与分离纯化
2、重组DNA技术的基本步骤 ▪ ①目的基因的获得与载体的制备 ▪ ②目的基因与载体DNA的连接 ▪ ③重组DNA分子导入受体细胞 ▪ ④重组体的筛选与重组DNA的鉴定 ▪ ⑤克隆基因的表达及表达产物的检测与分离纯化 5.1 重组DNA技术发展史
5. 1重组DNA技术发展史重组DNA技术操作的主要步骤载体目的基因(外源基因）噬菌体病毒基因组DNA人工合成PCR产物CDNAU限制酶消化开环载体DNA目的基因连接酶重组体转化体外包装，转染带重组体的宿主筛选表型筛选酶切电泳鉴定菌落原位杂交
重组DNA技术操作的主要步骤 载体 质粒 噬菌体 病毒 目的基因（外源基因） 基因组DNA cDNA 人工合成 PCR产物 限制酶消化 开环载体DNA 目的基因 连接酶 重组体 转化 体外包装，转染 带重组体的宿主 筛选 表型筛选 酶切电泳鉴定 菌落原位杂交 5.1 重组DNA技术发展史
5.1重组DNA技术发展史5.1.5重组DNA技术的意义「重组DNA技术填平了生物种属间不可逾越的鸿沟重组DNA技术缩短了进化时间重组DNA技术使人能对生物进行定向改造体外大量扩增、研究其结构、功能及调控机制从而拓宽了分子生物学的研究领域，这对医学上各种疾病等病因的香明、诊断及治疗具有重大意义
5.1.5重组DNA技术的意义 ▪ 重组DNA技术填平了生物种属间不可逾越的鸿沟 ▪ 重组DNA技术缩短了进化时间 ▪ 重组DNA技术使人能对生物进行定向改造 ▪ 体外大量扩增、研究其结构、功能及调控机制， 从而拓宽了分子生物学的研究领域，这对医学上 各种疾病等病因的查明、诊断及治疗具有重大意 义。 5.1 重组DNA技术发展史
5. 1重组DNA技术发展史5.1.6重组DNA实验中常见的主要工具酶酶类功能识别并在特定位点切开DNA限制性核酸内切酶DNA连接酶通过磷酸二酯键把两个或多个DNA片段连接成一个DNA分子按5到3方向加入新的核苷酸，补平DNA双链中的DNA聚合酶 I缺口反转录酶按照RNA分子中的碱基序列，根据碱基互补原则合成DNA链把磷酸基团加到多聚核苷酸链的5'-0H未端多核苷酸激酶在双链核酸的3未端加上多聚单核苷酸未端转移酶从DNA链的3'未端逐个切除单核苷酸DNA外切酶 II从DNA链的5'未端逐个切除单核苷酸入噬菌体DNA外切酶切除位于DNA链5'或3'未端的磷酸基团碱性磷酸酯酶
酶类 功能 限制性核酸内切酶 识别并在特定位点切开DNA DNA连接酶 通过磷酸二酯键把两个或多个DNA片段连接成一个 DNA分子 DNA聚合酶Ⅰ 按5‘到3’方向加入新的核苷酸，补平DNA双链中的 缺口 反转录酶 按照RNA分子中的碱基序列，根据碱基互补原则合 成DNA链 多核苷酸激酶 把磷酸基团加到多聚核苷酸链的5’-OH末端 末端转移酶 在双链核酸的3‘末端加上多聚单核苷酸 DNA外切酶Ⅲ 从DNA链的3’末端逐个切除单核苷酸 λ噬菌体DNA外切酶 从DNA链的5’末端逐个切除单核苷酸 碱性磷酸酯酶 切除位于DNA链5’或3’末端的磷酸基团 5.1.6重组DNA实验中常见的主要工具酶 5.1 重组DNA技术发展史
5. 1、重组DNA技术发展史限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶（restrictionendonuclease,RE)一类能识别和切割双链DNA分子中特定碱基顺序的核酸水解酶BamHIGGGATCCGATCCXGCCTAGGCCTAG分类：I、、Ⅲ（基因工程技术中常用Ⅱ型）
限制性核酸内切酶 GGATCC CCTAGG G CCTAG GATCC G + Bam HⅠ 限制性核酸内切酶(restriction endonuclease, RE) 一类能识别和切割双链DNA分子中特定碱基顺序的核酸 水解酶 分类: Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ （基因工程技术中常用Ⅱ型） 5.1、 重组DNA技术发展史