Areallchromosomesattached to thespindle?Isall DNAreplicated?METAPHASE-TO-ANAPHASEIs environmentfavorable?TRANSITIONG2/MCHECKPOINTTRIGGERANAPHASEANDENTERMITOSISPROCEEDTOCYTOKINESISMG2CONTROLLERG1SENTERCELLCYCLEANDPROCEEDTOSPHASESTARTCHECKPOINTIs environmentfavorable?How to study cell cycle progression?Howcanwe tell what stagean animal cell has reached inthecell cycle?三、细胞周期的研究方法1细胞周期各时相长短测定（1）脉冲标记DNA复制和细胞分裂指数观察测定法：标记有丝分裂百分数法（Percentageoflabelledmitosis，PLM法）此法目的是测定某一细胞群体的细胞周期的总时间Tc和各个时相的时长。方法简述：给机体注入3H一TdR（氛-胸腺嘧啶核苷氛标记胸苷），处于S期细胞吸收3H一TdR被标记，随后G2期细胞开始出现标记细胞，接着在一短的tm时间后，出现的全是标记分裂相，并在ts一tm时间内保持不变，最后标记分裂相聚然消失。依标记分裂指数曲线升降过程，可推求出细胞周期各时相的时长。优点：不仅可以测定细胞周期总时间，而且可以同时测出周期各个时相所持续的时间：缺点：放射性同位素要求专门设备：放射性物质对操作者的伤害和对周围环境的污染；放射性同位素本身对细胞周期也有一定干扰。目前可以采用BrdU取代H一TdR标记细胞，检测被标记的细胞可用抗BrdU抗体作免疫免疫细胞化学染色
How to study cell cycle progression? How can we tell what stage an animal cell has reached in the cell cycle? 三、细胞周期的研究方法 1 细胞周期各时相长短测定 （1）脉冲标记 DNA 复制和细胞分裂指数观察测定法； 标记有丝分裂百分数法（Percentage of labelled mitosis ，PLM 法） 此法目的是测定某一 细胞群体的细胞周期的总时间 Tc 和各个时相的时长。 方法简述：给机体注入 3H—TdR（氚-胸腺嘧啶核苷,氚标记胸苷），处于 S 期细胞吸收 3H— TdR 被标记，随后 G2 期细胞开始出现标记细胞，接着在一短的 tm 时间后，出现的全是 标记分裂相，并在 ts—tm 时间内保持不变，最后标记分裂相聚然消失。依标记分裂指数曲 线升降过程，可推求出细胞周期各时相的时长。 优点：不仅可以测定细胞周期总时间，而且可以同时测出周期各个时相所持续的时间； 缺点：放射性同位素要求专门设备；放射性物质对操作者的伤害和对周围环境的污染；放 射性同位素本身对细胞周期也有一定干扰。 目前可以采用 BrdU 取代 3H—TdR 标记细胞，检测被标记的细胞可用抗 BrdU 抗体作 免疫免疫细胞化学染色
1008060402051015202530Hoursafter3H-thymidineaddition(BrdU-labled epithelia cells of the zebrafish gut(Gree: S phase cells;BrdU-labledRKOcells(Gree:Sphasecells)（2）流式细胞分选仪测定法MeasuretheDNAcontentwithaflowcytometer(fluorescent-activated cellsorter,FACS)原理：将DNA染色后，DNA含量与荧光强度成正比：而DNA含量恰好跟细胞周期不同时相有关。G1期细胞的DNA含量是二倍体：S期是二倍体到四倍体：G2期和M期都是四倍体：通过流式细胞仪分选后，绘制如下图；
(BrdU-labled epithelia cells of the zebrafish gut(Gree: S phase cells; BrdU-labled RKO cells(Gree:S phase cells) （2）流式细胞分选仪测定法 Measure the DNA content with a flow cytometer(fluorescent-activated cell sorter, FACS) 原理：将 DNA 染色后，DNA 含量与荧光强度成正比；而 DNA 含量恰好跟细胞周期不同 时相有关。G1 期细胞的 DNA 含量是二倍体；S 期是二倍体到四倍体； G2 期和 M 期都 是四倍体；通过流式细胞仪分选后，绘制如下图；