产生相同序列的突出末端的不同片段 可有三种方式: ·)用同一种限制酶切割; ●2)用识别相同靶序列的不同限制酶切割; ·3)用识别不同靶序列但可产生一致的粘 性末端的限制酶切割
产生相同序列的突出末端的不同片段 可有三种方式: 1)用同一种限制酶切割; 2)用识别相同靶序列的不同限制酶切割; 3)用识别不同靶序列但可产生一致的粘 性末端的限制酶切割。 11
3、特点: 根据上述限制酶的特点,在基因工程和基因诊断 中的重要用途: 1)不论DNA的来源如何,同一种限制酶切割后产 生的粘性末端容易重新连接。因此可将不同种属 的DNA重组。如人和质粒DNA等 2)用于人类基因组的DNA分析, 具特定的酶切位 点。 3)Gene突变改变酶切位点的消失或新产生将改变 酶切片段长度。应用于限制性片段多态性分析。 12
3、特点: 根据上述限制酶的特点,在基因工程和基因诊断 中的重要用途: 1) 不论DNA的来源如何,同一种限制酶切割后产 生的粘性末端容易重新连接。因此可将不同种属 的DNA重组。如人和质粒DNA等。 2) 用于人类基因组的DNA分析,具特定的酶切位 点。 3) Gene突变改变酶切位点的消失或新产生将改变 酶切片段长度。应用于限制性片段多态性分析。 12
二、基因运载体及其选择 载体(Vector.):将外源目的DNA导入受体细 胞,并能自我复制和增殖的工具。 天TAAG EcoRI CTTAA AATTC 13
二、基因运载体及其选择 载体(Vector):将外源目的DNA导入受体细 胞,并能自我复制和增殖的工具。 13
载体具以下特征 )分子量小,便于携带较大的DNA片段,能进 入宿主细胞并在其中增殖; 2)有多种限制酶切点,每种限制酶最好只有 单一切点; 3)被切割后的载体,插入外源DNA后, 不影响 其复制能力,并有可选择的标记基因(如, 抗药基因)。 常用的载体有:质粒, 入噬菌体,粘粒, BAC, YAC,PI等
载体具以下特征: 1)分子量小,便于携带较大的DNA片段,能进 入宿主细胞并在其中增殖; 2)有多种限制酶切点,每种限制酶最好只有 单一切点; 3)被切割后的载体,插入外源DNA后,不影响 其复制能力,并有可选择的标记基因(如, 抗药基因)。 常用的载体有:质粒,λ噬菌体,粘粒,BAC, YAC,PI等。 14