2、液-液分配色谱liquid- liquid partition chromatography固定相与流动相均为液体(互不相溶);基本原理:组分在固定相和流动相上的分配:流动相:对于亲水性固定液,采用疏水性流动相,即流动相的极性小于固定液的极性(正相normal phase),反之,流动相的极性大于固定液的极性(反相reversephase)。正相与反相的出峰顺序相反;固定相:早期涂渍固定液,固定液流失,较少采用;
2、液-液分配色谱 liquid- liquid partition chromatography 固定相与流动相均为液体(互不相溶); 基本原理:组分在固定相和流动相上的分配; 流动相:对于亲水性固定液,采用疏水性流动相,即流动相 的极性小于固定液的极性(正相 normal phase),反之,流 动相的极性大于固定液的极性(反相 reverse phase)。正相 与反相的出峰顺序相反; 固定相:早期涂渍固定液,固定液流失,较少采用;
3、离子交换色谱ion-exchange chromatography固定相:阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂流动相:阴离子离子交换树脂作固定相,采用酸性水溶液;阳离子离子交换树脂作固定相,采用碱性水溶液;基本原理:组分在固定相上发生的反复离子交换反应;组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大,保留时间长;阳离子交换:R一SO,H+M+=RSO,M+H+阴离子交换:RNR,OH+X-=RNRX+OH应用:离子及可离解的化合物,氨基酸、核酸等
3、离子交换色谱 ion-exchange chromatography 固定相:阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂; 流动相:阴离子离子交换树脂作固定相,采用酸性水溶 液;阳离子离子交换树脂作固定相,采用碱性水溶液; 基本原理:组分在固定相上发生的反复离子交换反应; 组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存 在形式等有关。亲和力大,保留时间长; 阳离子交换:R—SO3H +M+ = R—SO3 M + H + 阴离子交换:R—NR4OH +X- = R—NR4 X + OH- 应用:离子及可离解的化合物,氨基酸、核酸等
4、离子对色谱ion pair chromatography原理:将一种(或多种)与溶质离子电荷相反的离子对离子或反离子)加到流动相中使其与溶质离子结合形成疏水性离子对化合物,使其能够在两相之间进行分配:阴离子分离:常采用烷基铵类,如氢氧化四丁基铵或氢氧化十六烷基三甲铵作为对离子;阳离子分离:常采用烷基磺酸类,如己烷磺酸钠作为对离子;反相离子对色谱:非极性的疏水固定相(C1.柱),含有对离子Y+的甲醇-水或乙睛-水作为流动相,试样离子X进入流生成疏水性离子对Y+X后;在两相间分配。动相后,生
4、离子对色谱 ion pair chromatography 原理:将一种(或多种)与溶质离子电荷相反的离子( 对离子或反离子)加到流动相中使其与溶质离子结合形成疏 水性离子对化合物,使其能够在两相之间进行分配; 阴离子分离:常采用烷基铵类,如氢氧化四丁基铵或氢 氧化十六烷基三甲铵作为对离子; 阳离子分离:常采用烷基磺酸类,如己烷磺酸钠作为对 离子; 反相离子对色谱:非极性的疏水固定相(C18柱),含有对 离子Y+的甲醇-水或乙腈-水作为流动相,试样离子X-进入流 动相后,生成疏水性离子对Y+ X -后;在两相间分配
5、排阻色谱size- exclusion chromatography固定相:凝胶(具有一定大小孔隙分布);原理:按分子大小分离。小分子可以扩散到凝胶空隙,由其中通AL选择添透过,出峰最慢;中等分子只能通过全渗透全排斥部分凝胶空隙,中速通过;而大分子被排斥在外,出峰最快;溶剂分子小,故在最后出峰洗脱体积全部在死体积前出峰;可对相对分子质量在100-105范围内的化合物按质量分离
5、排阻色谱 size- exclusion chromatography 固定相:凝胶(具有一定大小孔隙分布); 原理:按分子大小分离。小分 子可以扩散到凝胶空隙,由其中通 过,出峰最慢;中等分子只能通过 部分凝胶空隙,中速通过;而大分 子被排斥在外,出峰最快;溶剂分 子小,故在最后出峰。 全部在死体积前出峰; 可对相对分子质量在100-105范 围内的化合物按质量分离
6、亲和色谱(AC)Affinity chromatograph原理:利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异性亲和力,进行选择性分离。先在载体表面键合上一种具间隔基手臂亲和物其他组分有一般反应性能的所谓间隔臂(环氧、联胺等),再连接上配基流动相(酶、抗原等),这种固载化的配基将只能和具有亲和力特性亲和物吸附的生物大分子作用而被保留改变淋洗液后洗脱。亲和色谱法示意图
6、亲和色谱(AC) Affinity chromatograph 原理:利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异性 亲和力,进行选择性分离。 先在载体表面键合上一种具 有一般反应性能的所谓间隔臂( 环氧、联胺等),再连接上配基 (酶、抗原等),这种固载化的 配基将只能和具有亲和力特性 吸附的生物大分子作用而被保 留。改变淋洗液后洗脱