目录CONTENTS1实验材料2实验步骤
目 录 CONTENTS 1 2 实验材料 实验步骤
实验材料01RNA模板：TotalRNA,miRNA02仪器：PCR仪
实验材料 01 RNA模板：Total RNA, miRNA03 05 06 02 仪器：PCR仪
对RNA模板的要求逆转录酶以RNA为模板合成第一链cDNA，模板RNA的质量和数量直接影响逆转录的结果。1.模板的完整性：模板RNA的完整性对逆转录非常重要，若RNA模板中含有RNase酶将降解模板RNA,最后导致cDNA产物的量少甚至无CDNA产物。2.模板的纯度：若RNA模板中含有蛋白、盐离子、EDTA、乙醇、酚等杂质，将影响逆转录酶的活性，最后影响逆转录结果。3.模板量：一般模板RNA量为50ng-2μg。（若模板RNA的量大于2μg则需按比例扩大反应体系。）
对RNA 模板的要求 逆转录酶以RNA为模板合成第⼀链cDNA，模板RNA的质量和数量直接影响 逆转录的结果。 1. 模板的完整性：模板RNA的完整性对逆转录⾮常重要,若RNA模板中 含有RNase酶将降解模板RNA,最后导致cDNA产物的量少甚⾄⽆ cDNA产物。 2. 模板的纯度：若RNA模板中含有蛋⽩、盐离⼦、EDTA、⼄醇、酚等 杂质,将影响逆转录酶的活性,最后影响逆转录结果。 3. 模板量：⼀般模板RNA量为50ng-2µg。（若模板RNA的量⼤于2µg, 则需按⽐例扩⼤反应体系。）
实验操作（简易流程）vsFastQuantRTKitTraditionalRT21min140minRNADNase1(30min)gDNase(3min)gDNA去除酚/氯仿抽提纯化（40min）gDNA-Free RNARTQuant(18min)M-MLV(70min)gDNA-FreecDNA
实验操作（简易流程） 03 05 06
实验步骤（在冰上操作1.将模板RNA在冰上解冻；5×gDNA Buffer、FQ-RTPrimer Mix、10xFast RT Buffer、RNase-FreeddH20在室温（15-25C）解冻，解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶液涡旋振荡混匀，简短离心以收集残留在管壁的液体
1. 将模板RNA在冰上解冻;5×gDNA Buffer、FQ-RT Primer Mix、10×Fast RT Buffer、 RNase-Free ddH2O在室温(15-25°C)解冻,解冻后迅速置于冰 上。使⽤前将每种溶液 涡旋振荡混匀,简短离⼼ 以收集残留在管壁的液体。 实验步骤 （在冰上操作）