6.生物大分子制备物的均一性(即纯度)的鉴定,要 求达到一维电泳一条带,二维电泳一个点,或 HPLC和毛细管电泳都是一个峰。 7.产物的浓缩,干燥和保存
制备生物大分子的分离纯化方法 蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识, 主要是利用它们之间特异性的差异,如分子的大小、形状 酸碱性、溶解性、溶解度、极性、电荷和与其他分子的亲和 性等。 各种方法的基本原理可以归纳为两个方面: ①利用混合物中几个组分分配系数的差异,把它们分配到两 个或几个相中,如盐析、有机溶剂沉淀、层析和结晶等;
②将混合物置于某一物相(大多数是液相)中, 通过物理力场的作用,使各组分分配于不同的区 域,从而达到分离的目的,如电泳、离心、超滤 等。 目前纯化蛋白质等生物大分子的关键技术是电泳 层析和高速与超速离心
要了解的生物大分子的物理、化学性质主要有: ①在水和各种有机溶剂中的溶解性 ②在不同温度、pH值和各种缓冲液中生物大分子的稳定性。 ③固态时对温度、含水量和冻干时的稳定性 ④各种物理性质:如分子的大小、穿膜的能力、带电的情况 在电场中的行为、离心沉降的表现、在各种凝胶、树脂等填 料中的分配系数。 ⑤其他化学性质:如对各种蛋白酶、水解酶的稳定性和对各 种化学试剂的稳定性。 ⑥对其他生物分子的特殊亲和力
分析测定的方法主要有两类: 即生物学和物理、化学的测定方法。 物理、化学方法主要有:比色法、气相色谱和液相色谱 法、光谱法(紫外/可见、红外和荧光等分光光度 法)、电泳法、以及核磁共振等。 生物学的测定法主要有:酶的各种测活方法、蛋白质含 量的各种测定法、免疫化学方法、放射性同位素示踪 法等 实际操作中尽可能多用仪器分析方法,以使分析测定更 加快速、简便