分子杂交( hybridization)根据碱基互补配对原则，将样品DNA双链经变性处理，在低于变性温度25℃条件下，加入已标记的单链DNA探针，样品中与探针互补的DNA序列可与探针形成杂交双链DNA，通过显示标记物或其它方法来检测特定的核酸片段
分子杂交（ hybridization） ◼ 根据碱基互补配对原则，将样品 DNA 双链 经变性处理，在低于变性温度25 ℃条件下， 加入已标记的单链 DNA探针，样品中与探针 互补的DNA 序列可与探针形成杂交双链 DNA，通过显示标记物或其它方法来检测特 定的核酸片段
Southern blotGel electrophoresisNitrocellulosefilterFilterpaperNitrocelluloseSpongeGelAlkaline solution碱性溶液HybridizewithprobeAutoradiogram
Southern blot 碱性溶液
限制性片段长度多态性分析（RFLPs）RFLP可应用于对致病基因尚一无所知或知之基少，还没有搞清其基因突变位点的，依靠基因外与其基因紧密连锁的RFLPS为遗传标志，进行间接分析。因为基因外或基因内的突变可引起限制酶切位点的丢失或新位点的出现有些则没有。所以DNA用限制酶水解后，由于酶切位点的有无，得到的DNA片段长度也不一样由电泳分离限制片段大小再由标记探针与限制片段杂交显示出来。对那些致病基因已完全了解的，可根据酶切位点的有无，结合DNA探针杂交直接分析做出判断
RFLP可应用于对致病基因尚一无所知或知之甚少,还没有 搞清其基因突变位点的,依靠基因外与其基因紧密连锁的 RFLPs 为遗传标志,进行间接分析。因为基因外或基因内 的突变可引起限制酶切位点的丢失或新位点的出现,有些 则没有。所以DNA用限制酶水解后,由于酶切位点的有无, 得到的DNA 片段长度也不一样,由电泳分离限制片段大小, 再由标记探针与限制片段杂交显示出来。对那些致病基因 已完全了解的,可根据酶切位点的有无,结合DNA 探针杂交, 直接分析做出判断。 限制性片段长度多态性分析(RFLPs)
EcoRI酶切示意图5'AG----GAATTC---GAATTC----GAATTC---CG 33'TC----CTTAAG---CTTAAG----CTTAAG---GC5AG----G AATTC---G AATTC----G AATTC---CGTC----CTTAAG---CTTAAG----CTTAAG---GC5'AG----GAATTC---GAATCC----GAATTC---CG 33'TC----CTTAAG---CTTAGG----CTTAAG---GC5'AG---GAATTC---GAATCC--GAATTC---CGTC----CTTAAG---CTTAGG----CTTAAG---CG
◆ 5’ AG-GAATTC-GAATTC-GAATTC-CG 3’ 3’ TC-CTTAAG-CTTAAG-CTTAAG-GC 5’ AG-G AATTC-G AATTC-G AATTC-CG TC-CTTAA G-CTTAA G-CTTAA G-GC 5’ AG-GAATTC-GAATCC-GAATTC-CG 3’ 3’ TC-CTTAAG-CTTAGG-CTTAAG-GC 5’ AG-G AATTC-GAATCC-G AATTC-CG TC-CTTAA G-CTTAGG-CTTAA G-CG EcoRⅠ酶切示意图