(3)化学与生物化学方法： 1) 自溶法：将新鲜的生物材料存放于一定的pH和适当 的温度下，细胞结构在自身所具有的各种水解酶 （如蛋白酶和酯酶等）的作用下发生溶解，使细胞 内含物释放出来。 2) 溶胀法：细胞膜为天然的半透膜，在低渗溶液和低 浓度的稀盐溶液中，由于存在渗透压差，溶剂分子 大量进入细胞，将细胞膜胀破释放出细胞内含物。 3) 酶解法：利用各种水解酶，如溶菌酶、纤维素酶、 蜗牛酶和酯酶等，于37℃，pH8，处理15分钟，可 以专一性地将细胞壁分解。 4) 有机溶剂处理法：利用氯仿、甲苯、丙酮等脂溶性 溶剂或SDS（十二烷基硫酸钠）等表面活性剂处理 细胞，可将细胞膜溶解，从而使细胞破裂，此法也 可以与研磨法联合使用。 ▪
(3)化学与生物化学方法： 1) 自溶法：将新鲜的生物材料存放于一定的pH和适当 的温度下，细胞结构在自身所具有的各种水解酶 （如蛋白酶和酯酶等）的作用下发生溶解，使细胞 内含物释放出来。 2) 溶胀法：细胞膜为天然的半透膜，在低渗溶液和低 浓度的稀盐溶液中，由于存在渗透压差，溶剂分子 大量进入细胞，将细胞膜胀破释放出细胞内含物。 3) 酶解法：利用各种水解酶，如溶菌酶、纤维素酶、 蜗牛酶和酯酶等，于37℃，pH8，处理15分钟，可 以专一性地将细胞壁分解。 4) 有机溶剂处理法：利用氯仿、甲苯、丙酮等脂溶性 溶剂或SDS（十二烷基硫酸钠）等表面活性剂处理 细胞，可将细胞膜溶解，从而使细胞破裂，此法也 可以与研磨法联合使用。 ▪
2.2.3 生物大分子的提取 “提取”是在分离纯化之前将经过预处理或破碎的细胞置于溶剂 中，使被分离的生物大分子充分地释放到溶剂中，并尽可能保持 原来的天然状态不丢失生物活性的过程。 影响提取的因素主要有： 目的产物在提取的溶剂中溶解度的大小； 由固相扩散到液相的难易； 溶剂的pH值和提取时间等。 通常： 极性物质易溶于极性溶剂，非极性物质易溶于非极性溶剂； 碱性物质易溶于酸性溶剂，酸性物质易溶于碱性溶剂； 温度升高，溶解度加大； 远离等电点的pH值，溶解度增加。 提取时所选择的条件应有利于目的产物溶解度的增加和保持其生物 活性
2.2.3 生物大分子的提取 “提取”是在分离纯化之前将经过预处理或破碎的细胞置于溶剂 中，使被分离的生物大分子充分地释放到溶剂中，并尽可能保持 原来的天然状态不丢失生物活性的过程。 影响提取的因素主要有： 目的产物在提取的溶剂中溶解度的大小； 由固相扩散到液相的难易； 溶剂的pH值和提取时间等。 通常： 极性物质易溶于极性溶剂，非极性物质易溶于非极性溶剂； 碱性物质易溶于酸性溶剂，酸性物质易溶于碱性溶剂； 温度升高，溶解度加大； 远离等电点的pH值，溶解度增加。 提取时所选择的条件应有利于目的产物溶解度的增加和保持其生物 活性
⑴ 水溶液提取： 蛋白质和酶的提取一般以水溶液为主。稀盐溶液和缓冲液对蛋白 质的稳定性好，溶解度大，是提取蛋白质和酶最常用的溶剂。用 水溶液提取生物大分子应注意的几个主要影响因素是： 1) 盐浓度（即离子强度）： 离子强度对生物大分子的溶解度有极大的影响，有些物质，如 DNA-蛋白复合物，在高离子强度下溶解度增加。 绝大多数蛋白质和酶，在低离子强度的溶液中都有较大的溶解度， 如在纯水中加入少量中性盐，蛋白质的溶解度比在纯水时大大增 加，称为“盐溶”现象。盐溶现象的产生主要是少量离子的活动， 减少了偶极分子之间极性基团的静电吸引力，增加了溶质和溶剂 分子间相互作用力的结果。 为了提高提取效率，有时需要降低或提高溶剂的极性。向水溶液中 加入蔗糖或甘油可使其极性降低，增加离子强度（如加入KCl、 NaCl、NH4Cl或(NH4 ) 2SO4）可以增加溶液的极性。 ▪
⑴ 水溶液提取： 蛋白质和酶的提取一般以水溶液为主。稀盐溶液和缓冲液对蛋白 质的稳定性好，溶解度大，是提取蛋白质和酶最常用的溶剂。用 水溶液提取生物大分子应注意的几个主要影响因素是： 1) 盐浓度（即离子强度）： 离子强度对生物大分子的溶解度有极大的影响，有些物质，如 DNA-蛋白复合物，在高离子强度下溶解度增加。 绝大多数蛋白质和酶，在低离子强度的溶液中都有较大的溶解度， 如在纯水中加入少量中性盐，蛋白质的溶解度比在纯水时大大增 加，称为“盐溶”现象。盐溶现象的产生主要是少量离子的活动， 减少了偶极分子之间极性基团的静电吸引力，增加了溶质和溶剂 分子间相互作用力的结果。 为了提高提取效率，有时需要降低或提高溶剂的极性。向水溶液中 加入蔗糖或甘油可使其极性降低，增加离子强度（如加入KCl、 NaCl、NH4Cl或(NH4 ) 2SO4）可以增加溶液的极性。 ▪
2) pH值：蛋白质、酶与核酸的溶解度和稳定性与pH 值有关。过酸、过碱均应尽量避免，一般控制在 pH=6～8范围内，提取溶剂的pH应在蛋白质和酶的 稳定范围内，通常选择偏离等电点的两侧。 3) 温度：为防止变性和降解，制备具有活性的蛋白质 和酶，提取时一般在0℃～5℃的低温操作。 4) 防止蛋白酶或核酸酶的降解作用：加入抑制剂或 调节提取液的pH、离子强度或极性等方法使相应的 水解酶失去活性，防止它们对欲提纯的蛋白质、酶 及核酸的降解作用
2) pH值：蛋白质、酶与核酸的溶解度和稳定性与pH 值有关。过酸、过碱均应尽量避免，一般控制在 pH=6～8范围内，提取溶剂的pH应在蛋白质和酶的 稳定范围内，通常选择偏离等电点的两侧。 3) 温度：为防止变性和降解，制备具有活性的蛋白质 和酶，提取时一般在0℃～5℃的低温操作。 4) 防止蛋白酶或核酸酶的降解作用：加入抑制剂或 调节提取液的pH、离子强度或极性等方法使相应的 水解酶失去活性，防止它们对欲提纯的蛋白质、酶 及核酸的降解作用
5) 搅拌与氧化：搅拌能促使被提取物的溶解， 一般采用温和搅拌为宜，速度太快容易产生大 量泡沫，增大了与空气的接触面，会引起酶等 物质的变性失活。因为一般蛋白质都含有相当 数量的巯基，有些巯基常常是活性部位的必需 基团，若提取液中有氧化剂或与空气中的氧气 接触过多都会使巯基氧化为分子内或分子间的 二硫键，导致酶活性的丧失。在提取液中加入 少量巯基乙醇或半胱氨酸以防止巯基氧化
5) 搅拌与氧化：搅拌能促使被提取物的溶解， 一般采用温和搅拌为宜，速度太快容易产生大 量泡沫，增大了与空气的接触面，会引起酶等 物质的变性失活。因为一般蛋白质都含有相当 数量的巯基，有些巯基常常是活性部位的必需 基团，若提取液中有氧化剂或与空气中的氧气 接触过多都会使巯基氧化为分子内或分子间的 二硫键，导致酶活性的丧失。在提取液中加入 少量巯基乙醇或半胱氨酸以防止巯基氧化