(3) PCR 把寻找目的基因和 扩增目的基因两步操作并成一步。 PCR法,又称多聚酶链式反应, 是近年来开发出来的基因工程新技术, 宅的最大优点是把目的基因的寻找和 扩增,放在一个步骤里完成
(3)PCR —— 把寻找目的基因和 扩增目的基因两步操作并成一步。 PCR 法,又称多聚酶链式反应, 是近年来开发出来的基因工程新技术, 它的最大优点是把目的基因的寻找和 扩增,放在一个步骤里完成
PCR反疝分三步完成: 第一步——90C高下,使混合物的 DNA片断因变性而成单链。 第二步—50C温度下,引物DNA结 合在适于配对的DNA片断上。 第三步——70C温度下,由合成酶 (DNA高温聚合酶)催化,从引物开始 合成目的基因DNA
PCR 反应分三步完成: 第一步—— 90 0 C 高温下,使混合物的 DNA 片断因变性而成单链。 第二步—— 50 0 C 温度下,引物DNA结 合在适于配对的DNA片断上。 第三步—— 70 0 C 温度下,由合成酶 ( DNA 高温聚合酶)催化,从引物开始 合成目的基因DNA
PCR的三个步骠为一次循环,约需 5-10分钟。每经一次循环,所找到的 目的基因扩充一倍。经过20次循环, 即可扩增106倍,总共只需几个小时
PCR 的三个步骤为一次循环,约需 5-10 分钟。每经一次循环,所找到的 目的基因扩充一倍。经过 20 次循环, 即可扩增 106 倍,总共只需几个小时
(4)构造重组DNA分子 首先要有载体。 载体有好几种,常用的有: 质粒一一环状双链小分子DNA,透于 儆小片断基因的栽体。② 嗌菌体DNA一一线状双镂DNA,透于 儆大片断基因的载体
(4)构造重组 DNA 分子 首先要有载体。 载体有好几种,常用的有: 质粒--环状双链小分子DNA,适于 做小片断基因的载体。 噬菌体DNA--线状双链DNA,适于 做大片断基因的载体
其次要把目的基因“裝”到载体中 去。“安装”的过程,需要好几种工具 酶,其中头键的酶叫限制性内切酶。 此酶识别一定碱基序列,有的还可 切出“粘性”來端,使得目的基因和载 体的连接非常容易。 图二
其次要把目的基因“装”到载体中 去。“安装”的过程,需要好几种工具 酶,其中关键的酶叫限制性内切酶。 此酶识别一定碱基序列,有的还可 切出“粘性”末端,使得目的基因和载 体的连接非常容易