所以,基因工程的操作包合以下步骤: 获得目的基因 构造重组DNA分子 转化或转 表达 蛋白质产物的分离纯化
所以，基因工程的操作包含以下步骤： • 获得目的基因 • 构造重组 DNA 分子 • 转化或转染 • 表达 • 蛋白质产物的分离纯化
(1)得目的基因 到哪里去找目的基因? 从组织细胞中可以分离得到人/小鼠的 全套基因,称为基因文庠。文库中基因总 数就人来说约有3万个基因。如何从中 把需要的基因找出来?采取“钓”的办法。 这个办法通常称为印迹法
到哪里去找目的基因？ 从组织细胞中可以分离得到人/小鼠的 全套基因，称为基因文库。文库中基因总 数 就人来说约有 3 万个基因。如何从中 把需要的基因找出来？采取“钓”的办法。 这个办法通常称为印迹法。 （1）获得目的基因
印迹法的主要步骤: (1)基因文年一DNA用限制性内切 酶处理。 (2)DNA片断混合物通过电泳分离。 (3)电咏后,通过印迹技术转到酯酰 纤维游膜上,以便操作。 (4)用已知小片断DNA作为探针 互补结合需要找的基因片断。 (5)探针DNA片断已用放射性元素 标记,使胶片感光后可看出
印迹法的主要步骤： （1）基因文库－ DNA 用限制性内切 酶处理。 （2）DNA 片断混合物通过电泳分离。 （3）电泳后，通过印迹技术转到酯酰 纤维薄膜上，以便操作。 （4）用已知小片断DNA 作为探针， 互补结合需要找的基因片断。 （5）探针DNA 片断已用放射性元素 标记，使胶片感光后可看出
印迹法的关鍵是“分子杂交”,利用 喊基配对的原则,用一段小的已知的DNA 片断去寻找(“钓”)大的未知的基因片 断 探针DNA片断从何而来? 根据目的蛋白的氨基酸序列,只要其 中N一端15-20个氩基酸序列,按三联密 码转为40-60核菩酸序列,人工合成,即 为探针DNA片断
印迹法的关键是“分子杂交”，利用 碱基配对的原则，用一段小的已知的 DNA 片断去寻找（“钓”）大的未知的基因片 断。 探针 DNA 片断从何而来？ 根据目的蛋白的氨基酸序列，只要其 中 N－端 15－20 个氨基酸序列，按三联密 码转为40-60 核苷酸序列，人工合成，即 为探针DNA 片断
(2)目的基因的扩增 用上面的方法“钓”出的目的基 因,数量极少,所以,接下来必须经 过扩增,亦称为基因克隆。获得相当 数量的目的基因后,才能继续下一步 操作
（2）目的基因的扩增 用上面的方法“钓”出的目的基 因，数量极少，所以，接下来必须经 过扩增，亦称为基因克隆。获得相当 数量的目的基因后，才能继续下一步 操作