3.051/BE.340 吸附蛋白的测量 1.吸附蛋白的量化技术 a)标记方法:量化标记蛋白,使用已知的标准尺度 i)放射性同位素标记 采用放射性同位素与特殊的氨基酸残体 例如,采用11;1I:2P CH CH2>OH 把带放射性的蛋白加入到未标记的蛋白中的比例 (较小比例的放射性蛋白加入到未标记蛋白中) y代表测量和标准cpm/pg 优点:高信噪比→可测量微含量(ng) 缺点:Y发射具危险性、存在废物处理、需要蛋白分离 1荧光标记 标记物的可见光激发的荧光测量
6 3.051/BE.340 吸附蛋白的测量 1.吸附蛋白的量化技术 a) 标记方法：量化标记蛋白，使用已知的标准尺度 i) 放射性同位素标记 ¾ 采用放射性同位素与特殊的氨基酸残体 例如，采用 125I；131I；32P ¾ 把带放射性的蛋白加入到未标记的蛋白中的比例 （较小比例的放射性蛋白加入到未标记蛋白中） ¾ γ代表测量和标准 cpm/μg 优点：高信噪比 ⇒ 可测量微含量（ng） 缺点：γ发射具危险性、存在废物处理、需要蛋白分离 ii)荧光标记 ¾ 标记物的可见光激发的荧光测量
3.051/BE.340 例如,荧光素异硫氰酸盐(FITC) 共价结合于胺 优点:化学稳定 缺点:标记会影响到吸附,需要蛋白分离、信号弱 ii1)染色 分子标签吸附到蛋白上 例如,有机染料;抗体(例如,FITC标记) 优点:化学稳定,无蛋白隔离/修饰 缺点:染料无特异性吸附(强干扰) b)其他定量方法 i)表面HPLC(w/Uv检测) )XPS信号强度,例如,N(相对调节) ii)椭圆光度法一吸收层厚度(干)
7 3.051/BE.340 例如，荧光素异硫氰酸盐(FITC) 共价结合于胺 优点：化学稳定 缺点：标记会影响到吸附，需要蛋白分离、信号弱 iii)染色 ¾ 分子标签吸附到蛋白上 例如，有机染料；抗体（例如，FITC 标记） 优点：化学稳定，无蛋白隔离/修饰 缺点：染料无特异性吸附（强干扰） b）其他定量方法 i）表面 HPLC（w/UV 检测） ii）XPS 信号强度，例如，N1s（相对调节） iii）椭圆光度法－吸收层厚度（干）