个克隆载体所容纳的外原DNA片段的大小质粒:10kb2噬菌体:23kb黏粒:45kbBAC: 350kbYAC: 1000kb
个克隆载体所容纳的外原DNA片段的大小 n 质粒:10kb n λ噬菌体:23kb n 黏粒:45kb n BAC:350kb n YAC:1000kb
E.coil基因组DNA提取(3)(1)★与T裁体豆组PCR扩增目的基因苗种纯化和培养元4连接酸转化碱法抽提质粒回收电话蓝白汤羊卤蒸pBV220质粒检测PCR产物(目的基因)*饰选互姐子、测双醇切并回收双醇切并回收★双熊动质粒聘切产物目的基因醇动产物提取T互组页粒并回收T4连接聘2轮PCR扩、细胞总RNA的提取4三组DNA醇切、连接构注表达载体pBV-dps-6hisRT-PCR★实验流感受态转化HpBV-dps-2x-6his制各PCR产物(目的基因)程图表达裁体构连克隆(羊菌落)绿色框首体PCR鉴定双聘切、连接部分为纯选的阳性克隆互组DNA(融合基因表达发体)本学期要做的工程窗的诱导表达转化、薄选及融合蛋白诱导表达内容。亲和+SDS-PAGE板亲和层析表达产物检测纯化的目的蛋白(5)(2)印迹法签定目的蛋白目的蛋白的功能签定
实验流 程图 绿色框 部分为 本学期 要做的 内容
1.菌种纯化B.分区划线法人连续划线法OMC图2-1划线法分离纯化菌种---含质粒pBV220菌落
图2-1划线法分离纯化菌种-含质粒pBV220菌落 1.菌种纯化
2.碱裂解法抽提质粒E.coli细胞质粒DNA含染色体DNA沉淀物
2. 碱裂解法抽提质粒
3.载体结构EcoRI,Smal,BamHl,Sall,Hinc,Pt,HindilXrmml>载体应当具备的基本Bgll条件?IInBT1T2PRSspl-Xmnl>多克隆位点(MCS)HindlllpBV220HincllScalHindllCIts857Amp有什么用?Hincll-Pvul3666bpBgllonipBV220的物理图谱
3.载体结构 Ø 载体应当具备的基本 条件? Ø 多克隆位点(MCS) 有什么用?