4.PCR技术反应体系模板DNA:待扩增的目的片段特异性引物:人工合成的与待扩增的靶DNA两端序列互补的寡核苷酸片段,15-30bpDNA聚合酶dNTP含有Mg2+的缓冲液
反应体系 n 模板DNA:待扩增的目的片段 n 特异性引物:人工合成的与待扩增的靶DNA两端序列互补 的寡核苷酸片段,15-30bp n DNA聚合酶 n dNTP n 含有Mg2 +的缓冲液
基因上游基因下游有义链5端反向引物R正向引物F无义链3端ardo
F R
变性90-95℃PCR的反应程序延伸40-60℃70-75℃退火口变性90~95℃50s口退火40~60℃50s72℃口延伸50s上述三个步骤为一个循环,经25-30次循环后,可将模板DNA扩增达百万倍
PCR的反应程序 ¨ 变性 90~95℃ 50s ¨ 退火 40~60℃ 50s ¨ 延伸 72℃ 50s 变性 延伸 退火 90~95℃ 70~75℃ 40~60℃ 上述三个步骤为一个循环,经25-30次循环后,可将模板DNA 扩增达百万倍
PCR扩增后,能检测得到大量目的基因,为什么?目的基因以外的其他区域会不会被扩增?引物基因组V5'5'3'51引物
引物 引物 3’ 5’ 5’ 5’ PCR扩增后,能检测得到大量目的基因,为什么? 目的基因以外的其他区域会不会被扩增?