分子生物学实验---讨论课问题要求：8部分问题，每组选1，制作ppt分组讲解（每组10-20分钟）建议用图示方法简明解释各个问题各组汇报时可以提出新的问题并解答，其他组也可以提问
分子生物学实验 -讨论课问题 要求：8部分问题，每组选1，制作ppt分组讲解（每组10-20分钟） 建议用图示方法简明解释各个问题 各组汇报时可以提出新的问题并解答，其他组也可以提问
E.coil基因组DNA提取(1)(3)+与T载体三组PCR扩增目的基因首种纯化和培养人4连接酶转化碱法抽提质粒中国收电动蓝白斑单菌落PBV220质粒PCR产物（目的基因）检测铸选至姐子、测序双醇动并回收双醇动并国收王双寿切质拉聘切产物目的基因醇切产物提取T互组质粒并国收T4连换票2轮PCR扩增、细胞总RNA的提取4三姐DNA聘团、连接构注表达载体pBV-dps-6hisRT-PCR实验流程图感安态转化pBV-dps-2x-6his制备PCR产物（目的基因）表达载体构注绿色框部分克隆（单菌落）为本学期要|菌体PCR鉴定双幕切、连接做的内容。筛选的阳性克隆互组DNA（融合基因表达载体）工程菌的诱导表达转化、第选及融台蛋白诱导表达案和+SDS-PAGE粉亲和层析表达产物检测纯化的目的蛋白1(5)(2)印迹法签定目的至白目的蛋白的功能签定
实验流程图 绿色框部分 为本学期要 做的内容
第一部分一一实验概况1通过分子生物学实验课程基础实验部分，我们完成了一个什么课题？2.分子生物学实验（基因工程实验或DNA重组技术）包括了哪几个主要环节？3.列表说明基础实验部分各个实验环节所使用的主要试剂？（至少5种）、各个实验环节所使用主要仪器设备和用途？（至少5种）4.实验过程中用到哪些生物实验材料？5.微量移液器的使用需要注意什么？6.基础实验部分每个环节的预期实验结果是怎样的（结果图）？7进入分子生物学实验室进行实验时有哪些注意事项？
第一部分——实验概况 1.通过分子生物学实验课程基础实验部分，我们完成了一个什么课题？ 2.分子生物学实验（基因工程实验或DNA重组技术）包括了哪几个主 要环节？ 3.列表说明基础实验部分各个实验环节所使用的主要试剂？（至少5 种）、各个实验环节所使用主要仪器设备和用途？（至少5种） 4.实验过程中用到哪些生物实验材料？ 5.微量移液器的使用需要注意什么？ 6.基础实验部分每个环节的预期实验结果是怎样的（结果图）？ 7.进入分子生物学实验室进行实验时有哪些注意事项？
第二部分一一实验关键环节1.本实验的目的基因是什么？多大？2.本实验用的是什么载体？如何获得？3.如何获得和检测日的基因和载体？4.如何将目的基因和载体连接起来？（构建重组DNA）5.宿主是什么？怎么将自的基因导入宿主细胞中？6.怎么检测重组DNA是否导入宿主细胞了并将其筛选出来？7.如何使的基因表达？如何检测自的基因是否表达出了蛋白？
第二部分——实验关键环节 1.本实验的 目的基因是什么？多大？ 2.本实验用的是什么载体？如何获得？ 3.如何获得和检测目的基因和载体？ 4.如何将目的基因和载体连接起来？(构建重组DNA) 5.宿主是什么？怎么将目的基因导入宿主细胞中？ 6.怎么检测重组DNA是否导入宿主细胞了并将其筛选出来？ 7.如何使目的基因表达？如何检测目的基因是否表达出了蛋白？
第三部分一一获得目的基因1.PCR扩增目的基因的原理？反应程序有哪三步？温度是多少？每一步发生的反应？2.PCR体系包括哪些成分？3.PCR产物的长度由什么决定？扩增产物中有无非的基因产物？4.引物是如何设计的？引物除了含和模板配对的序列还有什么？扩出来的基因两端是怎样的？为什么要加入上述序列？5.如何检测PCR产物并判定其分子量大小？6.PCR产物中出现非特异性条带的原因是什么？如何减少非特异性扩增？7.要获得真核生物的目的基因为什么要做RT-PCR？
第三部分——获得目的基因 1.PCR扩增目的基因的原理？反应程序有哪三步？温度是多少？每一步发 生的反应？ 2.PCR 体系包括哪些成分？ 3. PCR 产物的长度由什么决定？扩增产物中有无非目的基因产物？ 4.引物是如何设计的？引物除了含和模板配对的序列还有什么？扩出来的 基因两端是怎样的？为什么要加入上述序列？ 5.如何检测PCR产物并判定其分子量大小？ 6. PCR产物中出现非特异性条带的原因是什么？如何减少非特异性扩增？ 7.要获得真核生物的目的基因为什么要做RT-PCR？