概念 酶分子改造 化学修饰,定点突变 定向进化
• 酶分子改造 – 化学修饰，定点突变 • 定向进化
定向进化示意图 随机突变+定向选择=目标突变体 最适生长温度提高了! 诱发突变的 因素 细菌 50℃培养 最适生长温度为 突变体库 选择压力 温度耐受型突 37℃C (温度) 变体
随机突变+定向选择＝目标突变体 细菌 诱发突变的 因素 50 0C培养 突变体库 选择压力 （温度） 温度耐受型突 变体 最适生长温度为 37 0C 最适生长温度提高了！
-Reactants Enzyme(s) Products一 1 Enzyme known? Screen or yes Catalytic directed evolution antibody 2 Adequate activity? es no 3 Adequate stability? rDNA Mutagenesis yes no 4 Readily available? Protein Molecular yes modelling 5 Process development Structure Strategies for the development of effective enzymes
Strategies for the development of effective enzymes
定向进化 属于蛋白质的非合理设计,它不需要事先了解 酶的空间结构和催化机制,人为地创造特殊的 进化条件,模拟自然进化机制(随机突变、基 因重组和自然选择),在体外改造酶基因,并 定向选择(或筛选)出所需性质的突变酶
– 属于蛋白质的非合理设计，它不需要事先了解 酶的空间结构和催化机制，人为地创造特殊的 进化条件，模拟自然进化机制（随机突变、基 因重组和自然选择），在体外改造酶基因，并 定向选择（或筛选）出所需性质的突变酶
澄清一个事实:定向进化不是定点突变 定向进化:突变筛选 突变位点是随机的,不确定的; 突变位点的数目也是不确定的; 突变的效应更是不可预知的; 理论上讲,凡是能够引起突变的因素(物理的,化学的, 生物的)都可以应用于定向进化中突变体的产生。 定点突变: 突变位点是确定的,突变的个数也是预知的 突变的效应可能是已知的,也可能是未知的 定点突变的方法一般是以PCR技术为基础的
• 定向进化：突变 筛选 突变位点是随机的，不确定的； 突变位点的数目也是不确定的； 突变的效应更是不可预知的； 理论上讲，凡是能够引起突变的因素（物理的，化学的， 生物的）都可以应用于定向进化中突变体的产生。 • 定点突变： 突变位点是确定的，突变的个数也是预知的； 突变的效应可能是已知的，也可能是未知的； 定点突变的方法一般是以PCR技术为基础的