生化分子生物学实验三酰甘油浓度的测定（乙酰丙酮显色法）
三酰甘油浓度的测定 （乙酰丙酮显色法） 生化分子生物学实验
实验目的掌握血清甘油三酯化学法测定的基本原理熟悉本法的操作过程与血清甘油三酯的参考范围
实 验 目 的 熟悉本法的操作过程与血清甘油三酯的参 考范围。 掌握血清甘油三酯化学法测定的基本原理
实验原理1CH2—O—CR1CH2OH0060-70℃3R-CH-O-C—R2+ KOH-C-O-K+HOCH皂化20min0CH2OHICH2—O—C—R3甘油甘油三酯钾皂氧化CH2OH0HIO4 2H-C-HHO-CHCH2OH甘油甲醛显色00H3C-CH3NH+H-CH+CH3--CH2--CH3H3CHCH3甲醛乙酰丙酮3,5-二乙酰-2,6二甲基吡啶（黄色）
甘油三酯 KOH 60-70℃ 20min 钾皂 甘油 + + HIO4 + NH4 + 甲醛 乙酰丙酮 3,5-二乙酰-2,6 二甲基吡啶 （黄色） 甘油 甲醛 皂化 氧化 显色 3 2 实 验 原 理
实验步骤试剂/管号空白管（B)标准管(S)测定管血清(T)血清0.20.2标准液蒸馏水0.20.2抽提抽提剂2.52.32.50.50.50.540mmol/LH,SO4边加边摇，用力振摇15秒，静置10min分层分别准确吸取上清液于另外3支试管中上清液0.30.30.3异丙醇1.01.01.0皂化皂化剂0.30.30.3充分混匀，556水浴保温5min氧化剂1.01.01.0氧化显色剂1.01.01.0显色充分混匀，56C水浴保温25min取出试管，流水/室温冷却，测420nm的吸光度以空白管调零
试剂/管号 空白管（B） 标准管(S) 测定管血清(T) 抽提 血清 - - 0.2 标准液 - 0.2 - 蒸馏水 0.2 0.2 - 抽提剂 2.5 2.3 2.5 40mmol/L H2SO4 0.5 0.5 0.5 边加边摇，用力振摇15秒，静置10min分层 分别准确吸取上清液于另外3支试管中 皂化 上清液 0.3 0.3 0.3 异丙醇 1.0 1.0 1.0 皂化剂 0.3 0.3 0.3 充分混匀，56℃水浴保温5min 氧化 显色 氧化剂 1.0 1.0 1.0 显色剂 1.0 1.0 1.0 充分混匀，56℃水浴保温25min 取出试管，流水/室温冷却，测420nm的吸光度 以空白管调零 实验步骤
实验结果A样品XC样品TG浓度(mg/ml)标准品A标准品mg/mlmmol/LX 1000国际单位摩尔质量g/mol(885)正常参考值为：0.1~1.5mg/ml0.11~1.69mmol/L
正常参考值为：0.1~1.5mg/ml 0.11~1.69mmol/L mmol/L 国际单位 mg/ml ————————— ×1000 摩尔质量g/mol (885) 实 验 结 果 ——— A样品 × C标准品 A标准品 样品TG浓度(mg/ml) =