对死亡动物进行尸检。观察期结束后，处死存活动物并进行大体解剖， 如有必要，进行病理组织学检查。 6.5可采用多种方法测定LD0,建议采用霍恩氏法、寇氏法、概率单位-对数 图解法、最大耐受量试验和上-下法等（见附录1-B)。 7鉴定报告 鉴定报告应包括如下内容： 7.1受试样品名称、理化性状、配制方法、所用浓度： 7.2实验动物的种属、品系和来源（注明合格证号和动物级别）： 7.3实验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、相对湿度、动物实验室合格 证号： 7.4所用剂量和动物分组，每组所用动物性别、数量及体重范围： 7.5染毒后动物中毒表现和死亡情况及出现时间，大体解剖及病理所见： 7.6计算LD5o的方法及其LD5o和95%可信限： 7.7列表报告结果（建议的表格形式见附录D): 7.8结论。 8试验结果的解释 通过急性经口毒性试验和LD的测定可评价受试样品的急性经口毒性、急 性经口毒性分级，其结果外推到人类的有效性很有限。 25
25 对死亡动物进行尸检。观察期结束后，处死存活动物并进行大体解剖， 如有必要，进行病理组织学检查。 6.5 可采用多种方法测定LD50，建议采用霍恩氏法、寇氏法、概率单位-对数 图解法、最大耐受量试验和上-下法等(见附录1-B)。 7 鉴定报告 鉴定报告应包括如下内容： 7.1 受试样品名称、理化性状、配制方法、所用浓度； 7.2 实验动物的种属、品系和来源（注明合格证号和动物级别）; 7.3 实验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、相对湿度、动物实验室合格 证号； 7.4 所用剂量和动物分组，每组所用动物性别、数量及体重范围； 7.5 染毒后动物中毒表现和死亡情况及出现时间，大体解剖及病理所见； 7.6 计算LD50的方法及其LD50和95%可信限； 7.7 列表报告结果（建议的表格形式见附录D）； 7.8 结论。 8 试验结果的解释 通过急性经口毒性试验和LD50的测定可评价受试样品的急性经口毒性、急 性经口毒性分级，其结果外推到人类的有效性很有限
急性眼刺激性/腐蚀性试验 Acute Eye Irritation/Corrosion Test 1范围 本规范规定了动物急性眼刺激/腐蚀性试验的基本原则、要求和方法 本规范适用于检测化学物的眼睛刺激性/腐蚀性。 2规范性引用文件 OECD Guidelines for Testing of Chemicals (No 405,Feb.1987) USEPA OPPTS Health Effects Test Guidelines (Series 870.2400,Aug.1998) 3试验目的 确定评价化学物对哺乳动物眼晴是否有刺激作用/腐蚀作用及其程度。 4定义 4.1眼睛刺激性(ye Irritation):指眼球表面接触受试样品后产生的可逆性炎 性变化。 4.2眼睛腐蚀性(Eye Corrosion):指眼球表面接触受试样品后引起的不可逆性 组织损伤。 5试验基本原则 5.1受试样品以一次剂量滴入每只实验动物的一侧眼晴结膜囊内，以未作处理的 另一侧眼睛作为自身对照； 5.2在规定的时间间隔内，观察对动物眼晴的刺激和腐蚀作用程度并评分，以此 评价受试样品对眼睛的刺激作用。观察时间应能足以评价刺激效应的可逆性和不 可逆性。观察时间最少72h,但一般不超过21d: 5.3当动物出现严重和持久的痛苦迹象时，以适当的方式将动物处死： 5.4强酸或强碱物质如pH≤2或pH≥11.5，由于其可预见的腐蚀特性，不必做本 试验： 5.5已在皮肤试验中证实具有腐蚀或严重刺激毒性的物质不必进行眼刺激试验， 可以推测该物质对眼睛将会引起相似的严重结果； 5.6在充分并公认的体外试验结果中确定可能产生刺激性或腐蚀性的物质不必 进行体内试验。 公
26 急性眼刺激性/腐蚀性试验 Acute Eye Irritation/Corrosion Test 1 范围 本规范规定了动物急性眼刺激/腐蚀性试验的基本原则、要求和方法 本规范适用于检测化学物的眼睛刺激性/腐蚀性。 2 规范性引用文件 OECD Guidelines for Testing of Chemicals (No 405，Feb.1987) USEPA OPPTS Health Effects Test Guidelines (Series 870.2400, Aug.1998) 3 试验目的 确定评价化学物对哺乳动物眼睛是否有刺激作用/腐蚀作用及其程度。 4 定义 4.1 眼睛刺激性(Eye Irritation)：指眼球表面接触受试样品后产生的可逆性炎 性变化。 4.2 眼睛腐蚀性(Eye Corrosion)：指眼球表面接触受试样品后引起的不可逆性 组织损伤。 5 试验基本原则 5.1 受试样品以一次剂量滴入每只实验动物的一侧眼睛结膜囊内，以未作处理的 另一侧眼睛作为自身对照； 5.2 在规定的时间间隔内，观察对动物眼睛的刺激和腐蚀作用程度并评分，以此 评价受试样品对眼睛的刺激作用。观察时间应能足以评价刺激效应的可逆性和不 可逆性。观察时间最少 72h，但一般不超过 21d； 5.3 当动物出现严重和持久的痛苦迹象时，以适当的方式将动物处死； 5.4 强酸或强碱物质如 pH≤2 或 pH≥11.5，由于其可预见的腐蚀特性，不必做本 试验； 5.5 已在皮肤试验中证实具有腐蚀或严重刺激毒性的物质不必进行眼刺激试验， 可以推测该物质对眼睛将会引起相似的严重结果； 5.6 在充分并公认的体外试验结果中确定可能产生刺激性或腐蚀性的物质不必 进行体内试验
6试验方法 6.1受试样品：液体、固体或半固体、颗粒物。 6.2实验动物和饲养环境 6.2.1动物种属 首选健康成年白色家兔，体重2~3kg。如果使用其它的哺乳动物做试验，试 验者应提供选择的依据。 6.2.2动物数量 如果受试样品的显著效应是可预见的，可以考虑用一只动物。如果用一只动 物试验得出的结果提示受试样品有严重的刺激性和腐蚀性，则不必进行进一步的 试验。如果结果相反，则至少需要3只家兔。有时，在增加动物的进一步试验中 应该适当的阐明可疑反应。 6.2.3饲养环境 动物实验室应符合国家相应规定。常规饲料喂养，自由饮水。 6.3剂量设计 对于液态受试样品，一般不需稀释，可直接使用原液，染毒量为0.1m1。若 受试样品为固态或颗粒状，应将其研磨成细粉状，过200目筛，染毒量应为100mg。 气溶胶产品需喷至容器中，收集其液体再使用。对挥发性物质，剂量可以通 过使用前后称量容器质量进行估计。 6.4试验步骤 6.4.1试验前眼睛的检查 试验前动物要在动物实验室环境中至少适应3d时间。试验前24h,要对实 验动物的两只眼晴进行常规检查。有眼睛刺激症状、角膜缺陷或结膜损伤的动物 不能用于试验。 6.4.2染毒 6.4.2.1轻轻拉开实验动物一侧眼睛的下眼脸，将受试样品0.1m1(100mg)滴入 (或放入)结膜囊中，使上、下眼帘被动闭合1s,以防止受试样品丢失。未处理 的另一侧眼睛作为自身对照。 6.4.2.2滴入受试样品24h内不冲洗眼晴，如果认为必要，在24h时可进行冲洗。 6.4.2.3如果受试样品有明显的刺激征象，另选3只动物进行冲洗试验。在滴入 受试样品30s后，用生理盐水冲洗5min,水的流量和流速都不应导致眼损伤。 6.4.3观察周期 观察时间最少要72h,也不能严格固定不变，但必须足够以充分评估观察到 的可逆或不可逆效应。通常观察时间一般不超过21d。 27
27 6 试验方法 6.1 受试样品：液体、固体或半固体、颗粒物。 6.2 实验动物和饲养环境 6.2.1 动物种属 首选健康成年白色家兔，体重 2～3kg。如果使用其它的哺乳动物做试验，试 验者应提供选择的依据。 6.2.2 动物数量 如果受试样品的显著效应是可预见的，可以考虑用一只动物。如果用一只动 物试验得出的结果提示受试样品有严重的刺激性和腐蚀性，则不必进行进一步的 试验。如果结果相反，则至少需要 3 只家兔。有时，在增加动物的进一步试验中 应该适当的阐明可疑反应。 6.2.3 饲养环境 动物实验室应符合国家相应规定。常规饲料喂养，自由饮水。 6.3 剂量设计 对于液态受试样品，一般不需稀释，可直接使用原液，染毒量为 0.1ml。若 受试样品为固态或颗粒状，应将其研磨成细粉状，过 200 目筛，染毒量应为 100mg。 气溶胶产品需喷至容器中，收集其液体再使用。对挥发性物质，剂量可以通 过使用前后称量容器质量进行估计。 6.4 试验步骤 6.4.1 试验前眼睛的检查 试验前动物要在动物实验室环境中至少适应 3d 时间。试验前 24h，要对实 验动物的两只眼睛进行常规检查。有眼睛刺激症状、角膜缺陷或结膜损伤的动物 不能用于试验。 6.4.2 染毒 6.4.2.1 轻轻拉开实验动物一侧眼睛的下眼睑，将受试样品 0.1ml(100mg)滴入 (或放入)结膜囊中，使上、下眼帘被动闭合 1s，以防止受试样品丢失。未处理 的另一侧眼睛作为自身对照。 6.4.2.2 滴入受试样品 24h 内不冲洗眼睛，如果认为必要，在 24h 时可进行冲洗。 6.4.2.3 如果受试样品有明显的刺激征象，另选 3 只动物进行冲洗试验。在滴入 受试样品 30s 后，用生理盐水冲洗 5min，水的流量和流速都不应导致眼损伤。 6.4.3 观察周期 观察时间最少要 72h，也不能严格固定不变，但必须足够以充分评估观察到 的可逆或不可逆效应。通常观察时间一般不超过 21d
6.4.4临床检查和评分 6.4.4.1在滴入受试样品后的第1h,24h,48h,72h和96h对眼晴进行检查，如 果72h时未出现刺激反应，可终止试验。如果发现累及角膜或有其它眼刺激作用， 7d内不恢复者，为确定该损害的可逆性或不可逆性需延长观察时间，一般不超 过21d。除了对角膜、虹膜、结膜进行观察外，其它损害效应都应记录并报告。 在24h观察和记录结束后，可使用荧光素钠对所有动物的眼睛作进一步检查。在 每次检查中均应按表1记录眼的刺激反应，并按表2进行眼刺激强度评价。 6.4.4.2在进行检查时，可使用放大镜、手持裂隙灯，并按表3记录 表1 眼各部位损伤评分表 部位及损伤情况 积分 角膜 A.混浊程度（以最致密部位为准） 无混浊 0 散在或弥漫性混浊，虹膜清晰可见 半透明区易分辨，虹膜轻度模糊不清 2 出现灰白色半透明区，虹膜模糊不清，瞳孔大小勉强可见 3 角膜混浊，虹膜无法辨认 B.角膜受损范围 <1/4 1/4~1/2 2 1/23/4 3 3/4~1 积分A×BX5最高积为80 虹膜 正常 0 皱褶明显加深、充血、水肿、角膜周围有充血（出现任何一项或任何 1 二项)，对光反应迟钝 对光反应消失、出血、肉眼可见严重损伤（出现其中一项或全部） 积分×5最高积分为10 结膜 A.充血，指睑结膜（包括角膜、虹膜的球结膜部分） 血管正常 0 血管充血，呈鲜红色 血管充血，呈深红色，个别血管难以辨认 2 弥漫性充血，呈深紫红色 3 B.水肿 无水肿 0 轻微水肿伴部分眼睑外翻 1 明显水肿伴部分眼脸外翻 2 水肿至眼脸近半闭合 水肿至眼睑超过半闭合 C.分泌物 无 0 少量分泌物（不包括动物内眦少量分泌物） 1 分泌物使眼睑和睫毛潮湿或粘着 2 分泌物使整个眼区潮湿或粘着 3 积分(A+B+C)×2 最高积分为20 角膜、虹膜和结膜反应累加最高积分为110 28
28 6.4.4 临床检查和评分 6.4.4.1 在滴入受试样品后的第 1h，24h，48h,72h 和 96h 对眼睛进行检查，如 果 72h 时未出现刺激反应，可终止试验。如果发现累及角膜或有其它眼刺激作用， 7d 内不恢复者，为确定该损害的可逆性或不可逆性需延长观察时间，一般不超 过 21d。除了对角膜、虹膜、结膜进行观察外，其它损害效应都应记录并报告。 在 24h 观察和记录结束后，可使用荧光素钠对所有动物的眼睛作进一步检查。在 每次检查中均应按表 1 记录眼的刺激反应，并按表 2 进行眼刺激强度评价。 6.4.4.2 在进行检查时，可使用放大镜、手持裂隙灯，并按表 3 记录 表 1 眼各部位损伤评分表 部位及损伤情况 积分 角膜 A．混浊程度(以最致密部位为准) 无混浊 0 散在或弥漫性混浊，虹膜清晰可见 1 半透明区易分辨，虹膜轻度模糊不清 2 出现灰白色半透明区，虹膜模糊不清，瞳孔大小勉强可见 3 角膜混浊，虹膜无法辨认 4 B．角膜受损范围 ＜1/4 1 1/4～l/2 2 1/2～3/4 3 3/4～1 4 积分 A×B×5 最高积为 80 虹膜 正常 0 皱褶明显加深、充血、水肿、角膜周围有充血(出现任何一项或任何 二项)，对光反应迟钝 1 对光反应消失、出血、肉眼可见严重损伤(出现其中一项或全部) 2 积分×5 最高积分为 10 结膜 A. 充血，指睑结膜(包括角膜、虹膜的球结膜部分) 血管正常 0 血管充血，呈鲜红色 1 血管充血，呈深红色，个别血管难以辨认 2 弥漫性充血，呈深紫红色 3 B.水肿 无水肿 0 轻微水肿伴部分眼睑外翻 1 明显水肿伴部分眼睑外翻 2 水肿至眼睑近半闭合 3 水肿至眼睑超过半闭合 4 C．分泌物 无 0 少量分泌物(不包括动物内眦少量分泌物) 1 分泌物使眼睑和睫毛潮湿或粘着 2 分泌物使整个眼区潮湿或粘着 3 积分(A+B+C)×2 最高积分为 20 角膜、虹膜和结膜反应累加最高积分为 110
表2 眼刺激强度评价标准 染毒后前4天 刺激反应持续时间 刺激强度 最高总积分平均值 (总积分平均值) 0 第1d≥0 无刺激性 2.5 第2d≥0 轻刺激性 第4d=0 轻刺激性 15 第4d>0 中度刺激性 第7d≤20，半数以上动物第7d≤10 中度刺激性 第7d≤20，半数以上动物第7d>10,但是无任何 25~ 一只动物7d>30 中度刺激性 第7d≤20，半数以上动物第7d>10,而且有一只 动物7d>30 重度刺激性 第7d>20 重度刺激性 50 重度刺激性 表3 裂隙灯观察眼刺激反应评分标准 角膜损伤 积分 虹膜 积分 1.水肿 l.前房(auterior Chamber) A.区域 A.细胞数 <1/4 1 很少量 1/4-1/2 中等数 2 1/2~3/4 很多 3 3/4-1 B.闪光(f1are) 轻微 1 B.致密度 中等 2 上皮水肿加上基质轻微水肿 明显 3 正常角膜的1.5倍厚 2 2.虹膜 正常角膜的2倍厚 3 A.虹膜充血 整个角膜不透明 轻度 中度 2 2.角膜荧光素钠着色 明显 3 A.散点状着色 B.瞳孔对光反应 <1/4 迟钝 1 1/4-1/2 消失 2 1/2-3/4 3 虹膜总分 11 3/4~1 眼睑和结膜损伤 积分 1.充血轻度 B.融合着色 中度 <1/4 1 明显 3 1/4-1/2 2 2.水肿 轻度 1 1/2-3/4 3 中度 2 3/4-1 明显 2 3.着色 轻(1/3) 1 3.角膜血管化、疤痕、色素沉着 中等(1/3-2/3) 2 A.范围（环状面） 大范围(2/3-1) <1/4 1 4.溃疡 轻度 1 1/4-1/2 2 中度 2 1/2-3/4 明显 3/4-1 5.疤痕 轻度 中等 4.角膜穿孔 明显 角膜总分 20 眼险和结膜总分 15 29
29 表 2 眼刺激强度评价标准 染毒后前 4 天 最高总积分平均值 刺激反应持续时间 （总积分平均值） 刺激强度 0～ 第 1d≥0 无刺激性 2.5～ 第 2d≥0 轻刺激性 15～ 第 4d=0 轻刺激性 第 4d＞0 中度刺激性 25～ 第 7d≤20，半数以上动物第 7d≤10 中度刺激性 第 7d≤20，半数以上动物第 7d＞10,但是无任何 一只动物 7d＞30 中度刺激性 第 7d≤20，半数以上动物第 7d＞10,而且有一只 动物 7d＞30 重度刺激性 第 7d＞20 重度刺激性 50～ 重度刺激性 表 3 裂隙灯观察眼刺激反应评分标准 角膜损伤 积分 虹 膜 积分 1．水肿 1.前房(auterior Chamber) A．区域 A．细胞数 ＜1/4 1 很少量 1 1/4～1/2 2 中等数 2 1/2～3/4 3 很多 3 3/4～1 4 B．闪光(flare) 轻微 1 B．致密度 中等 2 上皮水肿加上基质轻微水肿 1 明显 3 正常角膜的 1．5 倍厚 2 2．虹膜 正常角膜的 2 倍厚 3 A．虹膜充血 整个角膜不透明 4 轻度 1 中度 2 2．角膜荧光素钠着色 明显 3 A．散点状着色 B．瞳孔对光反应 ＜1/4 1 迟钝 1 1/4～1/2 2 消失 2 1/2～3/4 3 虹膜总分 11 3/4～1 4 眼睑和结膜损伤 积分 1．充血 轻度 1 B．融合着色 中度 2 ＜1/4 1 明显 3 1/4～1/2 2 2．水肿 轻度 1 1/2～3/4 3 中度 2 3/4～1 4 明显 3 3．着色 轻(1／3) 1 3．角膜血管化、疤痕、色素沉着 中等(1／3-2/3) 2 A．范围(环状面) 大范围(2／3-1) 3 ＜1/4 1 4. 溃疡 轻度 1 1/4～1/2 2 中度 2 1/2～3/4 3 明显 3 3/4～1 4 5．疤痕 轻度 1 中等 2 4.角膜穿孔 4 明显 3 角膜总分 20 眼险和结膜总分 15