(5)夹心杂交法(sanwich hybridization) RE RE A B A B 片段B捕捉探针 A B 固相支持物 片断A检测探针 本法优点： 特异性强，对样本纯度要求不高，定量较准确
16 （5）夹心杂交法（sanwich hybridization） A B RE RE A B A B 固 相 支 持 物 片段B捕捉探针 片断A 检测探针 本法优点： 特异性强，对样本纯度要求不高，定量较准确
(6）原位杂交(nucleic acid hybridization in situ) 将标记探针与细胞或组织切片中的核酸进行杂交， 进而检测特异的DNA或RNA序列。 细胞原位杂交 有 组织切片原位杂交 DNA-DNA RNA-DNA 三类杂交 RNA-RNA 该法优点： 不需提取核酸，故可完整保持组织或细胞的 形态，因而更能准确地反映组织细胞的功能状态
17 （6）原位杂交（nucleic acid hybridization in situ） 将标记探针与细胞或组织切片中的核酸进行杂交， 进而检测特异的DNA或RNA序列。 细胞原位杂交 组织切片原位杂交 DNA-DNA RNA-DNA 三类杂交 RNA-RNA 该法优点： 不需提取核酸，故可完整保持组织或细胞的 形态，因而更能准确地反映组织细胞的功能状态。 有
(二)聚合酶链反应PCR,polymerase chain reaction)技术 PCR是体外基因扩增技术。它利用体内DNA复制的 原理和DNA变性与复性的性质进行目的基因DNA的大量 扩增。 PCR基本原理： PCR技术在模板、dNTP、Mg2+等条件下，用耐热 的Taq酶代替DNA聚合酶，用合成的DNA引物代替RNA引 物，经过DNA变性、引物与模板结合（复性)和延伸3 个步骤的循环过程（25~30个循环)，目的DNA可扩增 100万倍以上
18 （二）聚合酶链反应(PCR，polymerase chain reaction)技术 PCR是体外基因扩增技术。它利用体内DNA复制的 原理和DNA变性与复性的性质进行目的基因DNA的大量 扩增。 1. PCR基本原理： PCR技术在模板、dNTP、Mg 2+等条件下，用耐热 的Taq酶代替DNA聚合酶，用合成的DNA引物代替RNA引 物，经过DNA变性、引物与模板结合（复性）和延伸3 个步骤的循环过程（2530个循环），目的DNA可扩增 100万倍以上
(1)DNA模板的变性 将待扩增DNA加热到95C左右，使双链DNA解开成 为单链（即：使模板DA或延伸后的双链NA发生热变性）， 并游离于反应体系中作为模板； (2)模板与引物的结合（退火或复性） 将体系温度降至合适温度(55℃左右)，使加入 的引物与模板DNA两端（3'端)碱基序列互补结合。 (由于加入的引物量远多于模板量，所以引物与模板的结合比 例远大于模板自身的复性)
19 （1）DNA模板的变性 将待扩增DNA加热到95 0C左右，使双链DNA解开成 为单链（即：使模板DNA或延伸后的双链DNA发生热变性 ）， 并游离于反应体系中作为模板； （2）模板与引物的结合（退火或复性） 将体系温度降至合适温度（55 0C左右），使加入 的引物与模板DNA两端（3ˊ端）碱基序列互补结合。 （由于加入的引物量远多于模板量，所以引物与模板的结合比 例远大于模板自身的复性）；
(3)引物延伸 将体系温度升到72c左右，Taq聚合酶催化dNTP 按碱基互补原则连接在DNA引物3·端，使引物延伸， 形成两条与模板互补的新链。 以上为一次PCR循环（变性、 复性和延伸) (新合成的链可作为下一轮循环的模板) 按照上述步骤重复操作，PCR产物呈指数扩增。 模板DNA扩增倍数T=2n(n:循环次数)
20 （3）引物延伸 将体系温度升到72 0C左右，Taq聚合酶催化dNTP 按碱基互补原则连接在DNA引物3ˊ端，使引物延伸， 形成两条与模板互补的新链。 以上为一次PCR循环（变性、复性和延伸） （新合成的链可作为下一轮循环的模板） 按照上述步骤重复操作，PCR产物呈指数扩增。 模板DNA 扩增倍数T=2n (n: 循环次数)