3.常用固相核酸杂交方法 Southern印迹杂交法(Southern blotting Northern印迹杂交法(Northern blotting) 斑点杂交或狭缝杂交法 Spot/Slot blot hybridization 菌落杂交(colony hybridization) 夹心杂交法(sanwich hybridization) 原位杂交(nucleic acid hybridization in situ)
11 3. 常用固相核酸杂交方法 Southern 印迹杂交法（Southern blotting ） Northern 印迹杂交法（Northern blotting ） 斑点杂交或狭缝杂交法 （Spot/ Slot blot hybridization） 菌落杂交（colony hybridization） 夹心杂交法（sanwich hybridization） 原位杂交（nucleic acid hybridization in situ）
(1) Southern印迹杂交法 (Southern blotting Gel electrophoresis Nitrocellulose filter Filter paper Nitrocellulose Sponge Gel Alkaline solution 三 Hybridize with probe Autoradiogram 限制性内切酶酶切 检测杂交信号 提取DNA Southern法可用于检测特异的DNA序列片断、 基因定位、分子量测定等。 12
12 (1) Southern 印迹杂交法 （Southern blotting ） 限制性内切酶酶切 检测杂交信号 提取DNA Southern 法可用于检测特异的DNA序列片断、 基因定位、分子量测定等
(2)Northern I 印迹杂交法 (Northern blotting (其基本过程类似于上述Southern法) 提取RNA样本→RNA变性→琼脂糖凝胶电泳分离→ 转移至膜→探针（标记DNA或RNA)与之杂交→显影 或显色→检测信号。 Northern法可用于检测组织细胞中总RNA或mRNA
13 （2）Northern 印迹杂交法 （Northern blotting ） （其基本过程类似于上述Southern法） 提取RNA样本→RNA变性→琼脂糖凝胶电泳分离→ 转移至膜→探针（标记DNA或RNA）与之杂交→显影 或显色→检测信号。 Northern法可用于检测组织细胞中总RNA或mRNA
(3)斑点杂交或狭缝杂交法： 基本过程： 将变性的DNA或RNA直接点到固相支持滤膜上→ 用标记探针与之杂交→自显影或显色反应→检测杂 交信号→分析结果。 优点： 简便、快速、灵敏、样本用量少； 缺点： 特异性不高，有一定比例的假阳性
14 （3）斑点杂交或狭缝杂交法： 基本过程： 将变性的DNA或RNA直接点到固相支持滤膜上→ 用标记探针与之杂交→自显影或显色反应→检测杂 交信号→分析结果。 优点： 简便、快速、灵敏、样本用量少； 缺点： 特异性不高，有一定比例的假阳性
(4)菌落杂交(colony hybr idization) Master plate Nitrocellulose filter Phage plaque Place nitrocellulose filter on plate Phages transferred to filter Denature, Hybridize with probe Perform autoradiography 该法可从大量细菌中筛选含特异的DNA序列及基因工程重组体
15 （4）菌落杂交（colony hybridization） 该法可从大量细菌中筛选含特异的DNA序列及基因工程重组体