2.λ噬菌体(λ phage) (1) ECOR I酶切→左:头、尾 右:复制、裂解。 中间:去除不影响繁殖、裂解等。 (2)易操作、阳性克隆多 (3)承载15-23kb 3.粘粒(柯斯质粒一 cosmid) (1)结构:丸噬菌体cos+质粒ori →既可以包装成噬菌体,又可以在细菌中大量复制 (2)承载:~50kb→克隆真核生物的基因、作图
2. 噬菌体（ phage） （1）EcoR I 酶切→ 左： 头、 尾 右： 复制、裂解。 中间：去除不影响繁殖、裂解等。 （2）易操作、阳性克隆多 （3）承载15-23 kb 3. 粘粒（柯斯质粒－cosmid） （1） 结构： 噬菌体cos＋质粒ori →既可以包装成噬菌体，又可以在细菌中大量复制。 （2） 承载：～50 kb →克隆真核生物的基因、作图
Ampi EcoRI pWE15 Noti 8048 bps mcs BamH neo r Cos S√40on ori一质粒复制原点,可以在细菌中扩增 sV40ori一噬菌体复制原点,可以在病毒中复制 cos-噬菌体包装 Neo一新潮霉素抗性基因 Ampr一氨苄霉素抗性基因
Ori－ 质粒复制原点，可以在细菌中扩增 SV40 Ori－噬菌体复制原点，可以在病毒中复制 cos－噬菌体包装 Neor－新潮霉素抗性基因 Ampr－氨苄霉素抗性基因 r
4.穿梭载体( shuttle vector) (1)定义:能在两种不同生物中复制的载体 种:原核生物( E coli) 种:真核生物(酵母) (2)结构: a.复制原点:ori-- E coli ARS(自主复制序列) 酵母(2μ) b.选择标记:两种宿主不同的标记。 酵母:URA3(尿嘧啶合成基因) 细菌:amp、Tc (3)应用: 在细菌中克隆基因 在酵母中表达
4. 穿梭载体（shuttle vector） （1）定义：能在两种不同生物中复制的载体。 一种：原核生物（E.coli） 一种：真核生物 （酵母） （2）结构： a. 复制原点：ori ---------------------------------E.coli ARS（自主复制序列）------- 酵母（2 ） b. 选择标记：两种宿主不同的标记。 酵母：URA3（尿嘧啶合成基因） 细菌：ampr 、Tcr （3）应用： 在细菌中克隆基因 在酵母中表达
on YEp24 69 bps ura3 图9-6穿梭质粒YEp24 YFp24具有二个抗生素抗性基因,在这 个基因序列内,分别具有可供克隆外 源DNA片段的酶切位点
T cr
5. YAC (Yeast Artificial Chromosome) (1)结构 白→赭 口来自酵母 染色体着丝粒:CEN4 CEN4 EcoRI SUP4 复制起始点:ARS1 TRP1/ARS1 选择基因:TRP一色氨酸合成基因 Amp pYAC4 URA3一尿嘧啶合成基因 41409beU Sup4 (tRnatyr) TEL TEL 口来自嗜热四膜虫: His3 BamHI 端粒:CE BamHI 日来自细菌: 图9-8酵母菌人工染色体pYAC4 复制起始点:Ori 在克隆外源DNA片段时,用BamH 和Ec0RI双酶切,得到二个人工染色 选择基因:ampr 体臂,与EC0R酶切的外源DNA片段 连接,构建成重组酵母菌人工染色体, 克隆位点: ECoRI(Sup4) 转化酵母菌细胞 填充序列:His3
5. YAC（Yeast Artificial Chromosome） （1）结构 来自酵母： 染色体着丝粒：CEN4 复制起始点：ARS1 选择基因：TRP－色氨酸合成基因 URA3－尿嘧啶合成基因 Sup4（tRNAtyr） 来自嗜热四膜虫： 端粒：CEL 来自细菌： 复制起始点：Ori 选择基因：ampr 克隆位点：EcoRI （Sup4） 填充序列：His 3 Ampr 白 → 赭