叶绿体色素的提取、分离、 理化性质和定量测定 制作人：刘洪庆 单 位： 植物生理学教研室
叶绿体色素的提取、分离、 理化性质和定量测定 制作人：刘洪庆 单 位： 植物生理学教研室
一、实验目的 1. 掌握叶绿素的理化性质及其定量测定方法， 加深学生对光合色素的理性、感性认识。 2. 熟练掌握分光光度计的使用原理及其方法
一、实验目的 1. 掌握叶绿素的理化性质及其定量测定方法， 加深学生对光合色素的理性、感性认识。 2. 熟练掌握分光光度计的使用原理及其方法
二、实验原理 1. 叶绿体色素提取、分离及理化性质 ◼ 提取：叶绿体色素不易溶于水而溶于有机溶剂特性 -丙酮等有机溶剂提取。 ◼ 色素分离：纸层析法分离。 ◼ 荧光现象：观察荧光。 ◼ 取代反应： 叶绿素中镁可被H +取代而形成褐色去镁叶绿素。 去镁叶绿素遇铜则成为铜代叶绿素。 ◼ 皂化反应： 叶绿素可与碱起皂化反应而形成醇（甲醇和叶绿 醇）和叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水-分开叶绿素 与类胡萝卜素
二、实验原理 1. 叶绿体色素提取、分离及理化性质 ◼ 提取：叶绿体色素不易溶于水而溶于有机溶剂特性 -丙酮等有机溶剂提取。 ◼ 色素分离：纸层析法分离。 ◼ 荧光现象：观察荧光。 ◼ 取代反应： 叶绿素中镁可被H +取代而形成褐色去镁叶绿素。 去镁叶绿素遇铜则成为铜代叶绿素。 ◼ 皂化反应： 叶绿素可与碱起皂化反应而形成醇（甲醇和叶绿 醇）和叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水-分开叶绿素 与类胡萝卜素
2. 定量测定 ◼ 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分 光光度计在某一特定波长下测定其光密度，即可用 公式计算出提取液中各色素的含量。 ◼ Ca=12.72D663 - 2.59D645 （1） ◼ Cb=22.88D645 - 4.67D663 （2） ◼ 将Ca与Cb相加即得叶绿素总量（CT）： ◼ CT=Ca+Cb=20.2D645+8.05D663（3） ◼ 或： ◼ CT=(D652×1000)/34.5 (4)
2. 定量测定 ◼ 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分 光光度计在某一特定波长下测定其光密度，即可用 公式计算出提取液中各色素的含量。 ◼ Ca=12.72D663 - 2.59D645 （1） ◼ Cb=22.88D645 - 4.67D663 （2） ◼ 将Ca与Cb相加即得叶绿素总量（CT）： ◼ CT=Ca+Cb=20.2D645+8.05D663（3） ◼ 或： ◼ CT=(D652×1000)/34.5 (4)
三、实验材料 ◼ 新鲜的菠菜
三、实验材料 ◼ 新鲜的菠菜