4、质粒载体的构建 (1)天然质粒的局限性 ①分子量大,拷贝数低 第一个用于基因克隆的天然质粒pSC101, 分子长91kb。 但只有一个EcOR切点充当克隆位点, e作为筛选标志
① 分子量大，拷贝数低 4、质粒载体的构建 （1） 天然质粒的局限性 第一个用于基因克隆的天然质粒pSC101， 分子长 9.1 kb。 但只有一个EcoR I切点充当克隆位点， Tetr 作为筛选标志
Hind iii Bamh i- ECOR I Xho Sal i yu Tet Sma Ima pSC101 9.09kb Hpa i
②筛选标志不理想 CoE1质粒的筛选标志是大肠杆菌素E1 ( colicin e1)。 colicin E1能杀死不含CoE1质粒的菌,形成 “噬菌斑” 唯一的克隆位点 ECOR I正好位于这个基因 的内部。 可以通过插入失活筛选。但细菌群体容易自 发突变出抗 colicin e1的细胞
ColE1质粒的筛选标志是大肠杆菌素E1 （colicin E1）。 ② 筛选标志不理想 可以通过插入失活筛选。但细菌群体容易自 发突变出抗colicin E1的细胞……. colicin E1能杀死不含ColE1 质粒的菌，形成 “噬菌斑”。 唯一的克隆位点 EcoR I 正好位于这个基因 的内部
ColEl i mmunity prote in (i mm) dI icin Ef prote in (cea> 10.2 kd ORF 6.7 kd ORF 13.8 kd ORF 6.4 kd ORF 8 kd ORF 6.0_ kd ORF 6K 6.9 kd ORF ORF mob1 protein gto start codon mob2 ORF try exclusion prote in 1 (excl) mob3 14.5 kd ORF mobs o mob ORF Qb7 ORF mob/ORF: Xxx entry exclusion prote in 2 (exc Legend: CDs +strand RNA +strand
ColE1
(2)质粒载体必须具备的基本条件 ①具有复制起点(OR|) 个质粒只含一个复制子( Replicon) ②具有抗菌素抗性基因 是筛选的标志。理想的载体应该有两种抗 菌素抗性基因 ③若干限制性内切酶的单一位点: 用来插入外源DNA片断。且插入后不影响复 制功能
① 具有复制起点（ORI） （2） 质粒载体必须具备的基本条件 ② 具有抗菌素抗性基因 ③ 若干限制性内切酶的单一位点： 是筛选的标志。理想的载体应该有两种抗 菌素抗性基因。 用来插入外源DNA片断。且插入后不影响复 制功能。 一个质粒只含一个复制子（Replicon)