实验须知 在微生物学实验过程中，可能接触病原微生物，有些病原微生物可引起人兽共患传染病， 如炭疽、布氏杆菌病、结核、狂犬病等。学生在操作过程中稍有疏忽，就有可能引起疫病流 行，甚至感染人身，危及生命。因此，既要求工作谨慎，严防实验室感染，防止事故，确保 安全，又要求严格训练。为此，在实验时必须遵守下列规定。 1。防止病原微生物的散宿 ()在实验时必须穿工作服，当接触或操作危险材料时，须穿戴胶靴、围裙、手套及眼镜，用 后应立即消毒清洗后，方可再用。在操作时，一定严肃认真，勿以手指或其他器物等接触口 唇、眼、鼻和面部，手和面部有伤口时，应避免危险材料的接触。 (②)使用危险材料应行无菌操作，盛危险材料的器皿要牢固，以免操作过程破裂，以防液体流 出，造成污染。用过的尸体、内脏、血液以及废弃的培养基、生物制品等，须严加消毒或深 埋。用过的棉球、纱布等污物，放在固定容器中，统一处理，不得随意抛弃。万一危险材料 滴出或打翻，或发生其他意外，应立即报告指导老师及时处理。如手指或皮肤受污染，立即 将手浸入消毒液中15min,然后用清水洗干净。沾有微生物的器皿应先消毒再进行洗涤。 (3)接种环、接种针用前用后必须于火焰中烧的灭菌。 (4)含有培养物的试管不可平放在桌面上，以防止液体流出。 (⑤)实验室内禁止饮食、吸烟及用嘴湿润铅笔及标签等物。 (6)操作危险材料时勿谈话或思考其他问题，以免分散注意力而发生意外 (7)菌种或种毒不得带出实验室，若要索取，应严格按规章办理。 (⑧)实验完毕，将操作台面用消毒液消毒，自身的手也须消毒和洗刷干净后方得离开实验室。 2.防火 切易燃品应远离火源。不可将酒精灯倾向另一酒精灯引火，以免发生爆炸。电炉、电热板、 煤油炉、煤气等用完后应立即关灭。如漏电、漏气等应立即修理，实验室内应有灭火器。 3.节约 (1)使用药品、试剂、染色剂、镜油、拭镜纸等应节约。 (②)使用仪器等要小心，按操作规程工作、保养，避免不必要的损耗和意外。 (3)吸管插入试管中时，要轻放到底才松手，以免娥破试管。 (④)平皿一般应倒放，即皿底在上，皿盖在下，以免拿时皿底掉下摔破。 (⑤)金属器皿用完消毒后，应立即擦干，防止生锈。 4.标记 所用各种试剂、染色剂、培养物、动物等，均需标记明确。要经高压消毒或蒸汽消毒的标签 应用深黑色铅笔书写，不可用毛笔、钢笔、圆珠笔书写，以免消毒后模糊不清。 5.记录 实验前应对本次实验目的、有关内容和操作技术进行预习：实验时在老师指导下进行，并遵 守实验程序，均不可潦草应付或不动手：实验时应作好记录，特别是实验内容、方法及结果 应详细记录，认真做好作业。 6.安全 最后一人离开实验室前，应检查一遍水、电、煤气，关好门窗。 7.清洁与秩序
1 实验须知 在微生物学实验过程中，可能接触病原微生物，有些病原微生物可引起人兽共患传染病， 如炭疽、布氏杆菌病、结核、狂犬病等。学生在操作过程中稍有疏忽，就有可能引起疫病流 行，甚至感染人身，危及生命。因此，既要求工作谨慎，严防实验室感染，防止事故，确保 安全，又要求严格训练。为此，在实验时必须遵守下列规定。 1．防止病原微生物的散布 (1)在实验时必须穿工作服，当接触或操作危险材料时，须穿戴胶靴、围裙、手套及眼镜，用 后应立即消毒清洗后，方可再用。在操作时，一定严肃认真，勿以手指或其他器物等接触口 唇、眼、鼻和面部，手和面部有伤口时，应避免危险材料的接触。 (2)使用危险材料应行无菌操作，盛危险材料的器皿要牢固，以免操作过程破裂，以防液体流 出，造成污染。用过的尸体、内脏、血液以及废弃的培养基、生物制品等，须严加消毒或深 埋。用过的棉球、纱布等污物，放在固定容器中，统一处理，不得随意抛弃。万一危险材料 滴出或打翻，或发生其他意外，应立即报告指导老师及时处理。如手指或皮肤受污染，立即 将手浸入消毒液中 1 5min，然后用清水洗干净。沾有微生物的器皿应先消毒再进行洗涤。 (3)接种环、接种针用前用后必须于火焰中烧灼灭菌。 (4)含有培养物的试管不可平放在桌面上，以防止液体流出。 (5)实验室内禁止饮食、吸烟及用嘴湿润铅笔及标签等物。 (6)操作危险材料时勿谈话或思考其他问题，以免分散注意力而发生意外。 (7)菌种或种毒不得带出实验室，若要索取，应严格按规章办理。 (8)实验完毕，将操作台面用消毒液消毒，自身的手也须消毒和洗刷干净后方得离开实验室。 2．防火 一切易燃品应远离火源。不可将酒精灯倾向另一酒精灯引火，以免发生爆炸。电炉、电热板、 煤油炉、煤气等用完后应立即关灭。如漏电、漏气等应立即修理，实验室内应有灭火器。 3．节约 (1)使用药品、试剂、染色剂、镜油、拭镜纸等应节约。 (2)使用仪器等要小心，按操作规程工作、保养，避免不必要的损耗和意外。 (3)吸管插入试管中时，要轻放到底才松手，以免戮破试管。 (4)平皿一般应倒放，即皿底在上，皿盖在下，以免拿时皿底掉下摔破。 (5)金属器皿用完消毒后，应立即擦干，防止生锈。 4．标记 所用各种试剂、染色剂、培养物、动物等，均需标记明确。要经高压消毒或蒸汽消毒的标签， 应用深黑色铅笔书写，不可用毛笔、钢笔、圆珠笔书写，以免消毒后模糊不清。 5．记录 实验前应对本次实验目的、有关内容和操作技术进行预习；实验时在老师指导下进行，并遵 守实验程序，均不可潦草应付或不动手；实验时应作好记录，特别是实验内容、方法及结果 应详细记录，认真做好作业。 6．安全 最后一人离开实验室前，应检查一遍水、电、煤气，关好门窗。 7．清洁与秩序
实验室中各物均应摆放一定位置，工作完后放回原处或指定地点，对实验室进行整理，清洁 后离开。 说明 一、适用专业：动物医学 二、目的和任务 1、通过实验，使学生逐步掌握《兽医微生物学》实验的基本操作方法，将理论知识同 生产实际紧密地结合起来。 2、通过实验，逐步提高学生的观察、分析、独立思考和独立解决问题的能力。并初步 学会分析和解决畜牧业中有关微生物学方面的基本问题。为动物传染病的诊断打下一定的 基础。 3、在实验过程中，逐步培养学生在科学研究中的严肃的态度、严格的要求、严密的方 法和严谨的作风。 三、主要教学内容和基本要求 1、主要内容： 本课程的主要实验内容有：细菌基本形态的观察、细菌抹片的制备及染色、细菌的分 离培养及培养特性的观察、细菌的生化试验、细菌的药物敏感试验、凝集试验与沉淀试验应、 血凝及血凝抑制试验及鸡胚接种等。 2、基本要求： (1)每次实验前负责实验课的老师及技术人员必须认真准备实验。 (2)学生在实验前必须预习实验指导，复习与本次实验有关的理论知识。 (3)在实验中，教师应认真负责地指导学生，并严格要求学生遵守实验室规则及操作 规范，认真、细致、大胆地完成实验任务。 (4)实验课后，学生的实验用品及用过的材料，按要求清洁整理安放，课后认真整理 实验结果，及时交实验报告，教师应认真及时的进行批改。 四、实验课程内容和学时分配 用实验项目名称 实验内容 时实验实验 每组 实验 已开/ 分 类别类型 人数 要求 未开 1显微镜油镜的 1、显微镜油镜的使用 2 基础验证 必做 己开 使用及细菌形 与保护 举 态的风容 2、细菌基本形态的而 2细菌抹片的制 1、细菌抹片的制备 基础验证 必做 己开 器及简单染色 2、美蓝染色法 类 法 3细特片的 1、细菌抹片的制各 基础 验证 必做 已开 备及革兰氏染 2、革兰氏染色法 类 类 色法 4细菌的分离培 1、细菌的分离培养 基础综合1 必做已开
2 实验室中各物均应摆放一定位置，工作完后放回原处或指定地点，对实验室进行整理，清洁 后离开。 说 明 一、适用专业：动物医学 二、目的和任务 1、通过实验，使学生逐步掌握《兽医微生物学》实验的基本操作方法，将理论知识同 生产实际紧密地结合起来。 2、通过实验，逐步提高学生的观察、分析、独立思考和独立解决问题的能力。并初步 学会分析和解决畜牧业中有关微生物学方面的基本问题。为动物传染病的诊断打下一定的 基础。 3、在实验过程中，逐步培养学生在科学研究中的严肃的态度、严格的要求、严密的方 法和严谨的作风。 三、主要教学内容和基本要求 1、主要内容： 本课程的主要实验内容有：细菌基本形态的观察、细菌抹片的制备及染色、细菌的分 离培养及培养特性的观察、细菌的生化试验、细菌的药物敏感试验、凝集试验与沉淀试验应、 血凝及血凝抑制试验及鸡胚接种等。 2、基本要求： （1）每次实验前负责实验课的老师及技术人员必须认真准备实验。 （2）学生在实验前必须预习实验指导，复习与本次实验有关的理论知识。 （3）在实验中，教师应认真负责地指导学生，并严格要求学生遵守实验室规则及操作 规范，认真、细致、大胆地完成实验任务。 （4）实验课后，学生的实验用品及用过的材料，按要求清洁整理安放，课后认真整理 实验结果，及时交实验报告，教师应认真及时的进行批改。 四、实验课程内容和学时分配 序 号 实验项目名称 实验内容 学时 分配 实验 类别 实验 类型 每组 人数 实验 要求 已开/ 未开 1 显微镜油镜的 使用及细菌形 态的观察 1、显微镜油镜 的使 用 与保护 2、细菌基本形态的观 察 2 基础 类 验证 类 1 必做 已开 2 细菌抹片的制 备及简单染色 法 1、细菌抹片的制备 2、美蓝染色法 2 基础 类 验证 类 1 必做 已开 3 细菌抹片的制 备及革兰氏染 色法 1、细菌抹片的制备 2、革兰氏染色法 2 基础 类 验证 类 1 必做 已开 4 细菌的分离培 1、细菌的分离培养 2 基础 综合 1 必做 已开
养及培养性 类 类 细菌的生化 1,糖（醇 发酵试 基 细的药物场 设计 人做 已开 感试验的设计 白平板凝试验 证 已开 基耐 沉淀试验 证 己开 琼脂扩散试验 血凝及血凝邦 血凝试 必 已开 制试验 2 血凝抑制试验 类 鸡胚接利 公现 己开 五、实验教科书、参考书 ()教科书 姚火春.兽医微生物学实验指导.北京：中国农业出版社，2002 口参考书 沈萍，范秀容，李广武.微生物学实验.北京：高等教育出版社，1999 实验一显微镜油镜的使用及细菌形态的观察 一、实验目的要求 1,正确掌握显微镜油镜的使用方法。 2.认识细菌的基本形态并绘图。 二、实验用品 生物显微镜、二甲苯、擦镜纸、香柏油、细菌标本片。 二、实验方法及步骤 (、油镜的使用 1、油镜的识别油浸物镜简称油镜，是接物镜中放大倍数最高的镜头。除病毒外，观察 细菌等微生物均要用普通生物显微镜的油镜。外形上油镜头最长，镜头的品片和透光口径最 小，一般在镜头下缘刻有一圈红线或黑线，注有100×或90×、油或O1字样
3 养及培养性状 的观察 2、细菌培养性状的观 察 类 类 5 细菌的生化试 验 1、糖（醇）发酵试验 2、吲哚形成试验 3、甲基红试验 4、维培试验 2 基础 类 综合 类 1 必做 已开 6 细菌的药物敏 感试验的设计 园纸片扩散试验 2 专业 基础 类 设计 类 1 必做 已开 7 凝集试验 鸡白痢平板凝集试验 2 专业 基础 类 验证 类 1 必做 已开 8 沉淀试验 1、炭疽环状沉淀反应 2、琼脂扩散试验 2 基础 类 验证 类 1 必做 已开 9 血凝及血凝抑 制试验 1、血凝试验 2、血凝抑制试验 2 专业 基础 类 验证 类 1 必做 已开 1 0 鸡胚接种 1、绒毛尿囊膜接种 2、绒毛尿囊腔接种 2 专业 基础 类 验证 类 1 必做 已开 五、实验教科书、参考书 ㈠教科书 姚火春.兽医微生物学实验指导.北京：中国农业出版社，2002 ㈡参考书 沈 萍，范秀容，李广武.微生物学实验.北京：高等教育出版社，1999 实验一 显微镜油镜的使用及细菌形态的观察 一、实验目的要求 1．正确掌握显微镜油镜的使用方法。 2．认识细菌的基本形态并绘图。 二、实验用品 生物显微镜、二甲苯、擦镜纸、香柏油、细菌标本片。 二、实验方法及步骤 ㈠、油镜的使用 1、油镜的识别 油浸物镜简称油镜，是接物镜中放大倍数最高的镜头。除病毒外，观察 细菌等微生物均要用普通生物显微镜的油镜。外形上油镜头最长，镜头的晶片和透光口径最 小，一般在镜头下缘刻有一圈红线或黑线，注有 100 ×或 90×、油或 Oil 字样
2、油镜的使用方法 ().调节光源用油镜检查细菌等染色标本时，光线宜强。为了获得最亮的光线须注意3 个要点：光圈开至最大：聚光器升至最高：反光镜用凹面。检查不染色的活菌标本时，宜用 较弱光线，此时可将集光器稍稍降低或将光圈缩小。 (②)将标本片放在载物台上，用弹簧夹固定，用移动器将标本调至光斑中间，先用低倍镜 找到染色的视野，然后换用高倍镜或油镜。使用油镜时，先加香柏油一滴于标本上，从侧面 看者油镜头，小心地转动粗螺旋，使油镜下降，先与油滴接触，再继续下降到几乎与载玻片 接触。然后从目镜观察，一面徐徐向上转动粗螺旋直到视野中出现模糊的物象，再转动微动 螺旋校准焦距至物象清晰为止。如果镜头己离开油面，仍未见到物象时，则可重复按照上述 步骤操作直到看清为止。必须注意油镜头己接触油滴后调焦距时只能让粗螺旋向反时 针转动提升镜头，绝对不能向顺时针转动下降镜头，否则有压碎标本片和损坏透镜的危险。 有的显微镜是净桶和油镜固定，转动载物台下面的粗螺旋，上升载物台，使标本表面的香柏 油与油镜头接触，然后转动微动螺旋，徐徐下降载物台，调准焦距进行观察的。 表实1H实验室几种常用物质的折光指数 名 折光指数 32 香油 香柏 树 151 9 液体石蜡油 1.33 使用油镜时之所以要加一滴香柏油，是由于油镜头的晶片极小，当镜头与标本片之间被 空气层所隔时，因空气的折光指数与玻璃不同，自标本透过的光线往往在空气中折光而不易 射入镜头内，使视野黑暗、物象不清。载玻片标本上滴一滴与玻璃的折光指数相近的油类 香柏油等（表实11），可避免透过的光线损失（图实11），进入油镜头的光量增多，视野亮 度增大，菌体观察才清晰。 (3).油镜观察完毕， 应提高镜 筒或降低载物台，取出标 0 本片，用拭 镜纸盖在标本的油滴上 气折光 并轻轻拖 过，以抹去标本上的大部 分油渍，利 于标本的保存和再次使 用。油镜头 上的香柏油先用拭镜纸 搽拭，再用 蘸有少量二甲苯的拭镜 纸搽拭，最 光钱 后再用拭镜纸将二甲苯 拭干，以免 图实1】油镜的使用源理 图实12香柏油壶
4 2、油镜的使用方法 ⑴.调节光源 用油镜检查细菌等染色标本时，光线宜强。为了获得最亮的光线须注意 3 个要点：光圈开至最大；聚光器升至最高；反光镜用凹面。检查不染色的活菌标本时，宜用 较弱光线，此时可将集光器稍稍降低或将光圈缩小。 ⑵.将标本片放在载物台上，用弹簧夹固定，用移动器将标本调至光斑中间，先用低倍镜 找到染色的视野，然后换用高倍镜或油镜。使用油镜时，先加香柏油一滴于标本上，从侧面 看着油镜头，小心地转动粗螺旋，使油镜下降，先与油滴接触，再继续下降到几乎与载玻片 接触。然后从目镜观察，一面徐徐向上转动粗螺旋直到视野中出现模糊的物象，再转动微动 螺旋校准焦距至物象清晰为止。如果镜头已离开油面，仍未见到物象时，则可重复按照上述 步骤操作直到看清为止。必须注意油镜头已接触油滴后调焦距时只能让粗螺旋向反时 针转动提升镜头，绝对不能向顺时针转动下降镜头，否则有压碎标本片和损坏透镜的危险。 有的显微镜是净桶和油镜固定，转动载物台下面的粗螺旋，上升载物台，使标本表面的香柏 油与油镜头接触，然后转动微动螺旋，徐徐下降载物台，调准焦距进行观察的。 使用油镜时之所以要加一滴香柏油，是由于油镜头的晶片极小，当镜头与标本片之间被 空气层所隔时，因空气的折光指数与玻璃不同，自标本透过的光线往往在空气中折光而不易 射入镜头内，使视野黑暗、物象不清。载玻片标本上滴一滴与玻璃的折光指数相近的油类— 香柏油等（表实 1-1），可避免透过的光线损失（图实 1-1），进入油镜头的光量增多，视野亮 度增大，菌体观察才清晰。 ⑶．油镜观察完毕， 应提高镜 筒或降低载物台，取出标 本片，用拭 镜纸盖在标本的油滴上 并轻轻拖 过，以抹去标本上的大部 分油渍，利 于标本的保存和再次使 用。油镜头 上的香柏油先用拭镜纸 搽拭，再用 蘸有少量二甲苯的拭镜 纸搽拭，最 后再用拭镜纸将二甲苯 拭干，以免
二甲苯溶化品片周围的粘胶，使品片脱落。如油滴已浓稠或干结，则可先用拭镜纸蘸少量二 甲苯，溶解并抹去镜头上的油渍，再用拭镜纸抹去残存的二甲苯。 (④)。显微镜用毕，将反光镜竖放，下降集光器，转动转换器，将低倍物镜对准载物台中 央圆孔或摆成八字形，下降镜筒，再将各部件抹干净，放入镜箱或罩上镜罩。 3、显微镜的维护 1.移动显微镜时要轻缓，勿使震动，搬动时右手把持镜臂，左手托住镜座。 2.显微镜应避免直接在阳光下曝晒，以免高温使粘胶溶解或变形，引起透镜脱落或破裂。 3.勿使显微镜与挥发性药品及腐蚀性酸碱类物品放在一起。 4.显微镜不能随便拆卸。各镜面避免用手沾抹，以防印上手印和长霉。 5.显微镜应放在干燥的地方，雨水多的季节应在镜箱内存放硅胶，以吸收水分。如长时 间不用，物镜和目镜应卸下放在干燥器中，以免受潮长霉。 白、细菌基本形态的观察 细菌基本形态在油镜下观察葡萄球菌、大肠杆菌、巴氏杆菌、沙门氏菌、猪丹毒杆菌、 乳酸杆菌、芽孢杆菌、放线菌等细菌标本片。注意细菌的基本形态、排列、颜色以及各种细 菌的相对大小。 四、作业 1如何正确使用油镜？ 2绘出葡萄球菌的形态 实验二细菌抹片制备及简单染色法 一、实验目的要求 1.掌握细菌抹片的制备方法， 2.掌握细美蓝染色方法。 二、实验用品 隔水式恒温培养箱、电冰箱、高压蒸汽灭菌器、生物显微镜、天平、接种环、酒精灯」 试管、营养琼脂、95%酒精、美蓝染色液、玻片、纱布、染色缸、洗瓶、吸水纸、试管架 二甲苯、擦镜纸、香柏油、火柴。 三、实验方法及步骤 、细菌抹片的制备 进行细菌染色之前，须先制好细菌抹片，其方法如下： 1、玻片准备新玻片或用后的玻片，应按附录一中（二）的方法处理后才用。用过很多 次，表面己有许多划痕的玻片应废弃。 手持玻片时，应以拇指、食指或中指夹住载玻片上下两边缘，以免表面粘上手印。载玻
5 二甲苯溶化晶片周围的粘胶，使晶片脱落。如油滴已浓稠或干结，则可先用拭镜纸蘸少量二 甲苯，溶解并抹去镜头上的油渍，再用拭镜纸抹去残存的二甲苯。 ⑷．显微镜用毕，将反光镜竖放，下降集光器，转动转换器，将低倍物镜对准载物台中 央圆孔或摆成八字形，下降镜筒，再将各部件抹干净，放入镜箱或罩上镜罩。 3、显微镜的维护 1．移动显微镜时要轻缓，勿使震动，搬动时右手把持镜臂，左手托住镜座。 2．显微镜应避免直接在阳光下曝晒，以免高温使粘胶溶解或变形，引起透镜脱落或破裂。 3．勿使显微镜与挥发性药品及腐蚀性酸碱类物品放在一起。 4．显微镜不能随便拆卸。各镜面避免用手沾抹，以防印上手印和长霉。 5．显微镜应放在干燥的地方，雨水多的季节应在镜箱内存放硅胶，以吸收水分。如长时 间不用，物镜和目镜应卸下放在干燥器中，以免受潮长霉。 ㈡、细菌基本形态的观察 细菌基本形态 在油镜下观察葡萄球菌、大肠杆菌、巴氏杆菌、沙门氏菌、猪丹毒杆菌、 乳酸杆菌、芽孢杆菌、放线菌等细菌标本片。注意细菌的基本形态、排列、颜色以及各种细 菌的相对大小。 四、作 业 1.如何正确使用油镜? 2.绘出葡萄球菌的形态. 实验二 细菌抹片制备及简单染色法 一、实验目的要求 1．掌握细菌抹片的制备方法。 2．掌握细美蓝染色方法。 二、实验用品 隔水式恒温培养箱、电冰箱、高压蒸汽灭菌器、生物显微镜、天平、接种环、酒精灯、 试管、营养琼脂、95%酒精、美蓝染色液、玻片、纱布、染色缸、洗瓶、吸水纸、试管架、 二甲苯、擦镜纸、香柏油、火柴。 三、实验方法及步骤 ㈠、细菌抹片的制备 进行细菌染色之前，须先制好细菌抹片，其方法如下： 1、玻片准备 新玻片或用后的玻片，应按附录一中（二）的方法处理后才用。用过很多 次，表面已有许多划痕的玻片应废弃。 手持玻片时，应以拇指、食指或中指夹住载玻片上下两边缘，以免表面粘上手印。载玻