菌种保藏的目的 保持菌种的存活率与优良遗传性状 防止菌种退化与污染 使已经退化的菌种恢复原有的性状 总之,就是防止优良遗传性状的 丧失和菌种死亡 LOGO
LOGO 一、菌种保藏的目的 ▪ 保持菌种的存活率与优良遗传性状 ； ▪ 防止菌种退化与污染 ▪ 使已经退化的菌种恢复原有的性状 总之，就是防止优良遗传性状的 丧失和菌种死亡
二、菌种保藏的原理 ■挑选典型培养物( typical culture)的优良纯种 并创造最有利于休眠的环境条件,使微生物处于 代谢不活泼、生长受抑制的休眠状态。 人工创造条件使微生物代谢活动处于不活泼状态 利用微生物的孢子、芽孢及营养体,给以不适合 其萌发、生长、繁殖的条件,即低温、干燥、缺 氧、缺营养等手段来达到菌种保藏的目的。 LOGO
LOGO 二、菌种保藏的原理 ▪ 挑选典型培养物（typical culture）的优良纯种， 并创造最有利于休眠的环境条件，使微生物处于 代谢不活泼、生长受抑制的休眠状态。 ▪ 菌种的保藏主要是依据微生物的生理、生化特性， 人工创造条件使微生物代谢活动处于不活泼状态。 利用微生物的孢子、芽孢及营养体，给以不适合 其萌发、生长、繁殖的条件，即低温、干燥、缺 氧、缺营养等手段来达到菌种保藏的目的
菌种的保藏方法 斜面保藏法 沙土保藏法 冷冻真空干燥保藏法 ■试管熔封保藏法 矿油保存法 LOGO
LOGO 三、菌种的保藏方法 ▪ 斜面保藏法 ▪ 沙土保藏法 ▪ 冷冻真空干燥保藏法 ▪ 试管熔封保藏法 ▪ 矿油保存法
(一)斜面保藏法 1、贴标签:将注有菌株名称和接种日期 的标签贴在试管斜面正上方 2、接种:将待藏菌种用些面接种法移种 至标明菌名的相应试管斜面上。 3、培养:细菌置37°℃恒温培养15~24h, 酵母菌置28~30℃恒温培养36~60h,放 线菌和丝状真菌置28℃培养4~7d 4、收藏:为防止棉塞受潮长杂菌,管口 棉花应用牛皮纸包扎或用熔化的固体石蜡 熔封棉塞后置4℃C冰箱保存。保存温度不 宜太低,否则会因结冰脱水而加速菌种的 死亡 斜面菌种 LOGO
LOGO （一）斜面保藏法 ▪ 1、贴标签：将注有菌株名称和接种日期 的标签贴在试管斜面正上方。 ▪ 2、接种：将待藏菌种用些面接种法移种 至标明菌名的相应试管斜面上。 ▪ 3、培养：细菌置37℃恒温培养15～24h， 酵母菌置28～30℃恒温培养36～60h，放 线菌和丝状真菌置28℃培养4～7d。 ▪ 4、收藏：为防止棉塞受潮长杂菌，管口 棉花应用牛皮纸包扎或用熔化的固体石蜡 熔封棉塞后置4℃冰箱保存。保存温度不 宜太低，否则会因结冰脱水而加速菌种的 死亡。 斜面菌种
(二)沙土管或硅胶管保藏法 处理沙土:取河沙经60目筛子过筛以除去大的颗粒,用10%HCL浸泡(用 量以浸没沙面为度)2~4h(或 30min 质,然后倒去盐酸, 用流水冲洗至中性,烘干或晒 取非耕作层瘦黄土(不含有机质)风 粉碎,用100~120目的筛子过筛备用。 ■2、装沙土管:将沙与土按2:1或4:1(W)比例混合均匀,装入试管 10mm×100mm 装置约1cm高,加棉塞后用高压蒸汽灭菌(121℃C灭 菌30min)。灭菌后取 肉膏蛋白胨或麦芽汁培养液中,在合适的温 度下培养一段时间确证无菌生长才能使用 3、制备菌液:吸3m无菌水至斜面菌种管内,用接种环轻轻搅动,洗一下孢 子制成孢子悬液 加孢子液:吸取上述孢子液0.1~0.5m于每一沙土管中,加入量以湿润沙 土达23高度为宜 ■5、干燥:将含菌的沙土管放入干燥器中,干燥器内用培养皿盛P2O5(或变 色硅胶)做干燥剂,再用真空泵抽气2~4h以加速干燥。 沙土管可选择下列 (1)保藏于王燥器中。(2)将沙士管取出 火焰熔封后保藏。(3)将沙土管装入含CaC2等干燥剂的大试管内,塞上 橡皮塞并用蜡封管口,置于4℃C冰箱中保藏 7、恢复培养:使用时挑少量混有孢子的沙士接种于斜面培养基上即可。沙土 管仍可原法继续保藏。 LOGO
LOGO （二）沙土管或硅胶管保藏法 ▪ 1、处理沙土：取河沙经60目筛子过筛以除去大的颗粒，用10%HCL浸泡（用 量以浸没沙面为度）2～4h（或煮沸30min）以除去有机质，然后倒去盐酸， 用流水冲洗至中性，烘干或晒干备用。另取非耕作层瘦黄土（不含有机质）风 干、粉碎，用100～120目的筛子过筛备用。 ▪ 2、装沙土管：将沙与土按2：1或4：1（W/W）比例混合均匀，装入试管 （10mm×100 mm）中，装置约1cm高，加棉塞后用高压蒸汽灭菌（121℃灭 菌30min）。灭菌后取少许置于牛肉膏蛋白胨或麦芽汁培养液中，在合适的温 度下培养一段时间确证无菌生长才能使用。 ▪ 3、制备菌液：吸3ml无菌水至斜面菌种管内，用接种环轻轻搅动，洗一下孢 子制成孢子悬液。 ▪ 4、加孢子液：吸取上述孢子液0.1～0.5ml于每一沙土管中，加入量以湿润沙 土达2/3高度为宜。 ▪ 5、干燥：将含菌的沙土管放入干燥器中，干燥器内用培养皿盛P2O5（或变 色硅胶）做干燥剂，再用真空泵抽气2～4h以加速干燥。 ▪ 6、收藏：沙土管可选择下列方法之一。⑴保藏于干燥器中。⑵将沙土管取出， 管口用火焰熔封后保藏。⑶将沙土管装入含CaCl2等干燥剂的大试管内，塞上 橡皮塞并用蜡封管口，置于4℃冰箱中保藏。 ▪ 7、恢复培养：使用时挑少量混有孢子的沙土接种于斜面培养基上即可。沙土 管仍可原法继续保藏