常用的高等哺乳动物受体细胞 迄今为止,用于医疗用品(药物、抗体、诊断试剂)大规模生产 的高等哺乳动物受体细胞主要还是中国仓鼠卵巢细胞(CHO),其优 势有如下几个方面: 遗传背景清楚,生理代谢稳定 与人的亲缘关系接近,外源蛋白修饰准确 基因转移和载体表达系统完善 ●耐受剪切力,便于大规模培养 ●被美国FDA确认为安全的基因工程受体细胞(GRAS)
常用的高等哺乳动物受体细胞 常用的高等哺乳动物受体细胞 迄今为止，用于医疗用品（药 迄今为止，用于医疗用品（药物、抗体、诊断试剂）大规模生产 物、抗体、诊断试剂）大规模生产 的高等哺乳动物受体细胞主要还是 的高等哺乳动物受体细胞主要还是中国仓鼠卵巢细胞（ 中国仓鼠卵巢细胞 （CHO CHO），其优 ），其优 势有如下几个方面： 势有如下几个方面： 遗传背景清楚，生理代谢稳定 遗传背景清楚，生理代谢稳定 与人的亲缘关系接近，外源蛋白修饰准确 与人的亲缘关系接近，外源蛋白修饰准确 基因转移和载体表达系统完善 基因转移和载体表达系统完善 耐受剪切力，便于大规模培养 耐受剪切力，便于大规模培养 被美国 被美国FDA FDA确认为安全的基因工程受体细胞（ 确认为安全的基因工程受体细胞（GRAS GRAS ））
8外源基因在哺乳动物细胞中的表达 C高等哺乳动物的载体系统 人腺病毒DNA ●猴空泡病毒DNA(SV40) 人乳多瘤病毒DNA(BK) 人牛痘病毒DNA
C 高等哺乳动物的载体系统 高等哺乳动物的载体系统 8 外源基因在哺乳动物细胞中的表达 外源基因在哺乳动物细胞中的表达 人腺病毒病DNA DNA 猴空泡病毒 猴空泡病毒DNA DNA（（SV40 SV40）） 人乳多瘤病毒DNA（BKV） 人牛痘病毒 人牛痘病毒DNA DNA
人腺病毒DNA 腺病毒的生物学特性 腺病毒科为线状双链DNA病毒,无包膜,呈二十面体,共有93个 成员,分哺乳动物腺病毒和禽腺病毒两个属。目前已鉴定的人腺病毒 有6个亚属,其中常用来构建载体的主要是C亚属的2型(Ad2)和5型 (Ad5)病毒。 腺病毒感染人细胞时呈裂解型,不致癌;但对啮齿目动物来说, 绝大多数的腺病毒成员均能致癌
人腺病毒DNA 腺病毒科为线状双链 腺病毒科为线状双链DNA DNA病毒，无包膜，呈二十面体，共有 病毒，无包膜，呈二十面体，共有9393个个 成员，分哺乳动物腺病毒和禽腺病 成员，分哺乳动物腺病毒和禽腺病毒两个属。目前已鉴定的人腺病毒 毒两个属。目前已鉴定的人腺病毒 腺病毒的生物学特性 有有66个亚属，其中常用来构建载体的主要是 个亚属，其中常用来构建载体的主要是CC亚属的 亚属的22型（型（Ad2 Ad2）和）和55型型 （（Ad5 Ad5）病毒。 ）病毒。 腺病毒感染人细胞时呈裂解型 腺病毒感染人细胞时呈裂解型，不致癌；但对啮齿目动物来说， ，不致癌；但对啮齿目动物来说， 绝大多数的腺病毒成员均能致癌。 绝大多数的腺病毒成员均能致癌
人腺病毒DNA 腺病毒的基因组DNA Va2 VA L1 L2 3 L4 L5 ITR ITR E1 E4 腺病毒基因组DNA全长36Kb,其包装上限为原基因组的105%,DNA两端各有 个反向重复序列();E1-E4为早期基因,与病毒基因组的复制及晚期基因的 表达调控有关,其中￡3编码晚期基因的调控因子,L1-L5为编码病毒包装蛋白的晚期 基因;Ⅳa2和WA均为病毒RNA聚合酶的亚基编码基因。E3区缺失只会影响病毒颗粒 的成熟,不影响基因组的复制功能,因而在构建载体时往往除去这个2.2Kb的片段, 使得载体的装载量提高到4kb以上
人腺病毒DNA 腺病毒的基因组DNA ITRITR ITRITR E1E1 E2E2 E3E3 E4E4 IVa2 IVa2 VAVA L1L1 L2L2 L3L3 L4L4 L5L5 腺病毒基因组 腺病毒基因组DNA DNA全长全长36 kb 36 kb，其包装上限为原基因组的 ，其包装上限为原基因组的105% 105%，， DNA DNA两端各有 两端各有 一个反向重复序列（ 一个反向重复序列（ITRITR）；）；E1-E4 E1-E4为早期基因，与病毒基因组的复制及晚期基因的 为早期基因，与病毒基因组的复制及晚期基因的 表达调控有关，其中 表达调控有关，其中E3E3编码晚期基因的调控因子， 编码晚期基因的调控因子，L1-L5 L1-L5为编码病毒包装蛋白的晚期 为编码病毒包装蛋白的晚期 基因； 基因；IVa2 IVa2和和VAVA均为病毒 均为病毒RNA RNA聚合酶的亚基编码基因。 聚合酶的亚基编码基因。E3E3区缺失只会影响病毒颗粒 区缺失只会影响病毒颗粒 的成熟，不影响基因组的复制功能， 的成熟，不影响基因组的复制功能，因而在构建载体时往往除去这个 因而在构建载体时往往除去这个2.2 kb 2.2 kb的片段， 的片段， 使得载体的装载量提高到 使得载体的装载量提高到4 kb 4 kb以上。 以上