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、影响杂交的因素 1核酸分子的浓度、长度和复杂性 2离子强度 3温度 4.杂交促进剂:硫酸葡聚糖等 5非特异性杂交反应 预杂交:用鲑鱼精子DNA封闭非特异 性杂交位点
二、影响杂交的因素 1.核酸分子的浓度、长度和复杂性 2.离子强度 3.温度 4.杂交促进剂：硫酸葡聚糖等 5.非特异性杂交反应 – 预杂交：用鲑鱼精子DNA封闭非特异 性杂交位点
第二节分子杂交的基本方法 Southern印迹法 Northern印迹法 斑点印迹杂交 固相杂交 原位杂交 Western印迹法 液相杂交
第二节 分子杂交的基本方法 • Southern 印迹法 • Northern 印迹法 • 斑点印迹杂交 • 原位杂交 • Western 印迹法 • 液相杂交 固相杂交
Southern blotting 1975年,英国 Edwen Southern创建 检测DNA杂交方法,即将DNA电泳、转 印到固相支持物上,用探针进行检测的 方法。 应用:基因组DNA的定性和定量分析 基因诊断、分子克隆、法医学等
一、Southern blotting • 1975年，英国Edwen Southern创建 • 检测DNA杂交方法，即将DNA电泳、转 印到固相支持物上，用探针进行检测的 方法。 • 应用：基因组DNA的定性和定量分析 基因诊断、分子克隆、法医学等
Southern bloting的主要步骤 1待测DNA样品的制备、酶切 2待测DNA样品的电泳分离:琼脂糖凝胶电泳 3凝胶中DNA的变性:碱变性 4 Southern转膜(印迹 毛细管虹吸印迹法、电转印法、真空转移法 5 Southern杂交(预杂交、杂交、洗膜) 6杂交结果的检测
Southern bloting的主要步骤 1.待测DNA样品的制备、酶切 2.待测DNA 样品的电泳分离：琼脂糖凝胶电泳 3.凝胶中DNA的变性：碱变性 4.Southern转膜(印迹)： 毛细管虹吸印迹法、电转印法、真空转移法 5.Southern杂交(预杂交、杂交、洗膜) 6.杂交结果的检测