核酸分子杂交实验包括如下两个步骤： 将核酸样品转移到固体支持物滤膜上，这 个过程特称为核酸印迹(nucleic acid blotting)转移，主要有电泳凝胶核酸印迹法、 斑点和狭线印迹法(dot and slot blotting)、 菌落和噬菌斑印迹法(colony and plaque blotting)； 将具有核酸印迹的滤膜同带有放射性标记 或其它标记的DNA或RNA探针进行杂交。 所以有时也称这类核酸杂交为印迹杂交
核酸分子杂交实验包括如下两个步骤： 将核酸样品转移到固体支持物滤膜上，这 个过程特称为核酸印迹(nucleic acid blotting)转移，主要有电泳凝胶核酸印迹法、 斑点和狭线印迹法(dot and slot blotting)、 菌落和噬菌斑印迹法(colony and plaque blotting)； 将具有核酸印迹的滤膜同带有放射性标记 或其它标记的DNA或RNA探针进行杂交。 所以有时也称这类核酸杂交为印迹杂交
( 基因组DNA DNA限制片段 b 基因组DN 标准分子量DNA 重物 (e9 胶 一高盐缓神液 (d) X光起片
保留 生长着转化菌落的平板 硝酸纤维素滤膜 甲装 ) ● 溶菌碱变性 酸中和洗去细胞碎片 置于溶菌液中的滤膜 统取阳性菌落 烤干 ( ( 杂交 0 放射自显影 显示阳性菌落斑点的X光底片 具DNA印迹的滤膜 图26检测重组体克隆的菌落杂交技术
P Color-or fluorescence- Colored or producing substrate fluorescent product Alkaline phosphatase Streptavidin Biotin Biotinylated probe Target DOOMGHGOOEMGHMOMOOMO Nitroceliulose Fig.9-2
3． 细菌的转化 所谓细菌转化，是指一种细菌菌株由于捕获了来 自另一种细菌菌株的DNA，而导致性状特征发生 遗传改变的生命过程。这种提供转化DNA的菌株 叫做供体菌株，而接受转化DNA的寄主菌株则称 做受体菌株。大肠杆菌是最广泛使用的实验菌株。 在加入转化DNA之前，必须预先用CaCl2处理大 肠杆菌细胞，使之呈感受态（Competent Cells）。 Mg2+对维持外源DNA的稳定性起重要作用，质粒 DNA中的抗生素是筛选标记。 对绝大多数hsdR-，hsdM-突变体菌株（k12）， 每ug DNA可得107-108个转化子
3． 细菌的转化 所谓细菌转化，是指一种细菌菌株由于捕获了来 自另一种细菌菌株的DNA，而导致性状特征发生 遗传改变的生命过程。这种提供转化DNA的菌株 叫做供体菌株，而接受转化DNA的寄主菌株则称 做受体菌株。大肠杆菌是最广泛使用的实验菌株。 在加入转化DNA之前，必须预先用CaCl2处理大 肠杆菌细胞，使之呈感受态（Competent Cells）。 Mg2+对维持外源DNA的稳定性起重要作用，质粒 DNA中的抗生素是筛选标记。 对绝大多数hsdR-，hsdM-突变体菌株（k12）， 每ug DNA可得107-108个转化子