INJECTCYTOPLASMINJECTCYTOPLASMspindleeasilyFROMM-PHASEFROMINTERPHASEdetectedatCELLCELLcell surfacenucleusVTOOCYTEISOOCYTEDRIVENINTOREMAINSMPHASEING2PHASE(A)(B)（注射实验表明：在成熟卵细胞的细胞质中，含有诱导卵母细胞成熟的因子，称做MPF。)(MasuiandMarkert'sexperiments(J.Exp.Zool.177:142,1971)What's the role of hormone?Trigger protein synthesis补充：有学者研究MPF活性与细胞周期之间的有一定的关系。1979,MPFactivityundergoes dramatin fluctuationsincleavingeggs thatcorrelatewithchanges inthecellcycle.MitosisMitosisMitosisInterphaseInterphaseInterphaseMPFactivityHighLow那其中的原因是什么呢，还是不知道。前面第一批学者，用细胞融合提出促有丝分裂因子的概念，第二批学者，用爪蟾卵母细胞成熟过程提出了促成熟因子的概念，那么第三批学者有哪些进展呢？(1)Nurse found cdc2Inthemid-197Osasapostdoc studyingthefissionyeast裂殖酵母S.pombe稷酒Dividebeforetheyhadreachedfullsize:Mutants-wee:Weel，wee2（获得的温度敏感型的突变株：例如20多度的时候它可以生长，当升高温度到40度时，就不生长了)The wee2 gene was later renamed cell division cycle 2(CDC2)研究发现，当突变株的酵母细胞长的不是足够大的情况下（与野生型相比），就开始分裂增殖，因此就将其称为wee突变，Weel，wee2；后来发现wee2基因，恰好跟细胞增殖的
（注射实验表明：在成熟卵细胞的细胞质中，含有诱导卵母细胞成熟的因子，称做 MPF。）（Masui and Markert’s experiments(J. Exp. Zool. 177:142,1971) What’s the role of hormone? Trigger protein synthesis 补充：有学者研究 MPF 活性与细胞周期之间的有一定的关系。 1979，MPF activity undergoes dramatin fluctuations in cleaving eggs that correlate with changes in the cell cycle. 那其中的原因是什么呢，还是不知道。前面第一批学者，用细胞融合提出促有丝分裂因 子的概念，第二批学者，用爪蟾卵母细胞成熟过程提出了促成熟因子的概念，那么第三 批学者有哪些进展呢？ ⑴Nurse found cdc2 In the mid-1970s as a postdoc studying the fission yeast 裂殖酵母 S.pombe 稷酒 Divide before they had reached full size:Mutants-wee: Wee1, wee2（获得的温度 敏感型的突变株；例如 20 多度的时候它可以生长，当升高温度到 40 度时，就不生长 了） The wee2 gene was later renamed cell division cycle 2(CDC2) 研究发现，当突变株的酵母细胞长的不是足够大的情况下（与野生型相比），就开始分裂 增殖，因此就将其称为 wee 突变，Wee1, wee2；后来发现 wee2 基因，恰好跟细胞增殖的
大小有关系，后来将其重新命名为细胞分裂周期2基因，celldivisioncycle2，简称CDC2.cdc2Dcde2Normal（如果将cdc2过表达，则发现，酵母细胞进行分裂增殖，而且比正常细胞明显小很多：如果将cdc2基因缺失，发现酵母已经长到正常的二倍大小了，但是居然刚刚进入分裂增殖）（结果分析：酵母从间期进入M期的时间明显发生改变）后来发现cdc2encodesaproteinkinasewith34KDwhoseactivityisrequiredforcellstoenterMphase(p34cde2)，它是细胞进入M期所必须的。Nobel knighi,SinPaul Nunwe(2)Hartwellfoundcdc28In 1982, Nurse and his colleagues found that CDC2 was identical in function to CDC288from也与buddingyeast芽殖酵母，S.cerevisiae啤酒，麦酒在芽殖酵母中有一个基因是CDC28，细胞增殖有关系，也能让酵母细胞从G2期进入M期，与cdc2是同源的，也是促进细胞周期运转的一个激酶
大小有关系，后来将其重新命名为细胞分裂周期 2 基因，cell division cycle 2，简称 CDC2. (如果将 cdc2 过表达，则发现，酵母细胞进行分裂增殖，而且比正常细胞明显小很多；如 果将 cdc2 基因缺失，发现酵母已经长到正常的二倍大小了，但是居然刚刚进入分裂增殖) （结果分析：酵母从间期进入 M 期的时间明显发生改变） 后来发现 cdc2 encodes a protein kinase with 34KD whose activity is required for cells to enter M phase(p34cdc2)，它是细胞进入 M 期所必须的。 ⑵Hartwell found cdc28 In 1982, Nurse and his colleagues found that CDC2 was identical in function to CDC28 from budding yeast 芽殖酵母, S. cerevisiae 啤酒,麦酒;在芽殖酵母中有一个基因是 CDC28，也与 细胞增殖有关系，也能让酵母细胞从 G2 期进入 M 期，与 cdc2 是同源的，也是促进细胞 周期运转的一个激酶
Fother ef the cell ayclLeeHodellTransformwithplasmid libraryof wild-typecdc28mS,cerevisiaeDNAcellsTransformedgrownGene Xcdc28tcellsat25"Cgrownat35*CGeneYNo colonyformationCDsolateplasmidCells in colonyatvarious cell-cyclestaoes（cdc28如何分离？获得了一些温度敏感突变株；分离相关功能的基因：提取野生型酵母的RNA→反转录成cDNA（complementary）→重组到载体上→构建cDNA文库→将重组载体转染突变型的酵母细胞，如果重组的基因对突变型的酵母细胞没有修复作用，则不能长出克隆，如果能长出克隆，说明此基因与酵母增殖有关则可以分离、测序；(3)TimHuntfoundcyclinin1983When thegel wasdeveloped onFriday 23 July 1982,Ifoundthat thestrongest band early on suddenly got very much weaker at about thetimewhen the eggs were about todivide intwo.Thiswas astunning,startingdiscovery."用海胆卵细胞为材料，受精以后，用35s标记的一个氨基酸作为蛋白质合成的前体，与海胆的受精卵孵育，不同时间点取样，电泳，进行放射性显影，结果发现，原来
（cdc28 如何分离？获得了一些温度敏感突变株；分离相关功能的基因：提取野生型酵母 的 RNA→反转录成 cDNA（complementary）→重组到载体上→构建 cDNA 文库→将重组载体 转染突变型的酵母细胞，如果重组的基因对突变型的酵母细胞没有修复作用，则不能长出 克隆，如果能长出克隆，说明此基因与酵母增殖有关则可以分离、测序； ⑶Tim Hunt found cyclin in 1983 When the gel was developed on Friday 23 July 1982, I found that the strongest band early on suddenly got very much weaker at about the time when the eggs were about to divide in two. This was a stunning, starting discovery.” 用海胆卵细胞为材料，受精以后，用 35S 标记的一个氨基酸作为蛋白质合成的前 体，与海胆的受精卵孵育，不同时间点取样，电泳，进行放射性显影，结果发现，原来
有些亮度较强的带，在某些时间点变弱了，说明卵裂过程中的蛋白质是周期性的出现与消失，因此就成这种蛋白为周期蛋白（cyclin）35S-Met:Fertilizedeggs日From Timand hiscolleagues16min60min80min120irterphasemitosisioterphasemitosiRAPCyelinAcyclin8ribonucleotidereductase(MPF随Cyclin浓度变化而变化））ribonucleotidereductase核（糖核）苷酸还原酶(cyclin:in sea urchin eggs that is destroyed at each cleavage division)(EvansT,RosenthalET,YoungblomJetal.Cyclin:aproteinspecifiedbymaternal mRNAin sea urchin eggs that is destroyed at eachcleavagedivision.Cell,1983,33(2):389-96.)
有些亮度较强的带，在某些时间点变弱了，说明卵裂过程中的蛋白质是周期性的出现与 消失，因此就成这种蛋白为周期蛋白（cyclin） (MPF 随 Cyclin 浓度变化而变化))ribonucleotide reductase 核(糖核)苷酸还原 酶 (cyclin:in sea urchin eggs that is destroyed at each cleavage division) (Evans T, Rosenthal E T, Youngblom J et al. Cyclin: a protein specified by maternal mRNA in sea urchin eggs that is destroyed at each cleavage division. Cell, 1983, 33(2): 389-96.)