级美 第六章 分子生物学基本研究法 (下)基因功能研究技术 nlPE& PgE
第六章 分子生物学基本研究法 （下）基因功能研究技术
级美 6.1基因表达研究技术 6.1.1基因表达系列分析技术( Serial Analysis of Gene Expression, SAGE) 是以DNA序列测定为基础分析全基因组表达 模式的技术。任何长度超过910个碱基的核 苷酸片段都可能代表一种特异性的转录产 物,因此,根据某个序列占总标签数的比例 可分析所对应基因的表达频率。 nlpe& PgE
6. 1 基因表达研究技术 6. 1. 1 基因表达系列分析技术（ Serial Analysis of Gene Expression，SAGE） 是以DNA序列测定为基础分析全基因组表达 模式的技术。任何长度超过9-10个碱基的核 苷酸片段都可能代表一种特异性的转录产 物，因此，根据某个序列占总标签数的比例 可分析所对应基因的表达频率
cDNA双链 AAAAA TTTTT·一生物素 AAAA TTTTTo 镭定酶AE酶切后,与抗生物素蛋白包裹 的微磁珠相连,分离3端酶切片段 AAAAA GTAC TTTT AAAAA GTAC TTTTT 图6-1常规SAGE方法 分两份,分别 与接头相连 ( short saGe)基本 [连搂 ACATG- AAAAA TTTTTe CCCTGTAC TTTTT一 流程 标签酶TE酶切 识别位点 识别位点 接子 GGGACATGXXXXXXI GGGACATGOOOOOO CCCTGTACXXXXXXXXXX CCCTGTACOOOOOOOOOC 末端补平 连搂 GGGACATGXXXXXXXXXX GGGACATGOOOOOOOOOO CCCTGTACXXXXXXXXXX 连接子2 CCctgtacoooooooooo 连接并根据接头1、2设计引物 连接子 GGGACATGXXXXXXXXXOOOOOOOOOCATGTCCC CCCTGTACXXXXXXXXXOOOOOOOOOGTACAGGG 连接子2 锚定酶酶切,分离纯化双 标签并串联入载体中 - CATGXXXXXXXXXOOOOOOOOOCATGXXXXXXXXXOOOOOOOOOCATG GATCEXXXXXXXXOOOOOOOOgGATCXXXXXXXXX80000ooooGATC AE TagI Tag3 Tag4 测序并用计算机辅助分析 nlPE& PgE
图6-1 常规SAGE方法 （short SAGE）基本 流程
级美 LongSAGE技术 标签来自转录物3端一段21bp的序列,可 以进行快速分析并与基因组序列数据相匹 配。其原理与 ShortAGE方法类似,只是 用了不同的S类标签酶(Mme),并将程 序做了相应修改 nlPE& PgE
LongSAGE技术 标签来自转录物3’端一段21bp的序列，可 以进行快速分析并与基因组序列数据相匹 配。其原理与ShortSAGE方法类似，只是 用了不同的IIS类标签酶（MmeI），并将程 序做了相应修改
级美 6.1.2RNA的选择性剪接技术 RNA的选择性剪接是指用不同的剪接方式从 个mRNA前体产生不同的mRNA剪接异构 体的过程。可分为:平衡剪切、5选择性剪 切、3’选择性剪切、外显子遗漏型剪切及相 互排斥性剪切。常用 RT-PCR法研究某个基 因是否存在选择性剪切。 nlPE& PgE
6. 1. 2 RNA的选择性剪接技术 RNA的选择性剪接是指用不同的剪接方式从 一个mRNA前体产生不同的mRNA剪接异构 体的过程。可分为：平衡剪切、5’选择性剪 切、3’选择性剪切、外显子遗漏型剪切及相 互排斥性剪切。常用RT-PCR法研究某个基 因是否存在选择性剪切