（二 ） 、质粒DNA的分离与纯化 1、氯化铯密度梯度离心法； 2、碱变性法； 3、微量碱变性法
（二 ） 、质粒DNA的分离与纯化 1、氯化铯密度梯度离心法； 2、碱变性法； 3、微量碱变性法
1.氯化铯密度梯度离心法 1、质粒DNA占总DNA的1%～2%； 2、在细胞裂解及DNA分离过程中，大分子 量的细菌染色体易断裂成线性片断，而质 粒DNA分子量小，结构紧密仍保持完整的 状态； 3、染色剂溴化乙锭（EB）能掺入到DNA 链的碱基中，导致链的解旋；而且形成的 EB- DNA复合物中，EB含量越高，密度会 越低
1.氯化铯密度梯度离心法 1、质粒DNA占总DNA的1%～2%； 2、在细胞裂解及DNA分离过程中，大分子 量的细菌染色体易断裂成线性片断，而质 粒DNA分子量小，结构紧密仍保持完整的 状态； 3、染色剂溴化乙锭（EB）能掺入到DNA 链的碱基中，导致链的解旋；而且形成的 EB- DNA复合物中，EB含量越高，密度会 越低
流程： 首先加入溶菌酶或十二烷基硫酸钠 （SDS）来促进大肠杆菌的细胞裂解。 将溴化乙锭的氯化铯溶液加到清亮的 大肠杆菌裂解液中，EB会嵌入到DNA链 的碱基中去。 在EB达到饱和时，进行氯化铯密度 梯度离心
流程： 首先加入溶菌酶或十二烷基硫酸钠 （SDS）来促进大肠杆菌的细胞裂解。 将溴化乙锭的氯化铯溶液加到清亮的 大肠杆菌裂解液中，EB会嵌入到DNA链 的碱基中去。 在EB达到饱和时，进行氯化铯密度 梯度离心
挑取单菌落接种在 5ml含抗菌素的培 养基中，37°C履荡培 养过夜 离心沉淀菌体 加人溶菌酶，去 污剂及高盐溶液 接种3ml过夜培 养物于100ml培 养基中 激烈穫荡使细胞重新悬浮，室 温下放置1Q分钟使细胞裂解 的 37C下展满扩增培 养3小时后，转接于两 瓶500ml培养基中 细胞碎片及染色 体DNA沉淀 离心收樂含质粒DNA的上清液 上清液（含质粒DNA) 蛋白质 染色体DNA及开环的质粒DNA 超盘旋的质粒DNA RNA 37℃下继续展荡培养，测 在上清液中加人CsCI和EtBr染料 0.D600=0.6时，加人氯群 15C下高速离心至平衡 素，再培养约10小时，使质 粒DNA括增 图4-13分离纯化质粒DNA的程序
石蜡油 蛋白质 缺口环形或线形的DNA 封闭环形的质粒DNA RNA沉淀