(三)扫描电子显微镜的样品制备方法及过程 1.扫描电子显微镜的样品制备方法 (1)表面复型法：该法是用碳、硅或火棉胶液的薄膜将标本 的表面拓印下来，再在透射电镜观察印在薄膜的精细结构。 此法常用于观察细胞或组织的表面结构。 (2)冰冻蚀刻法：此法是先将样品快速冻结，然后在真空喷 镀仪中用冷刀切小削样品，使其暴露细胞的内部结构，待切 面的冰在真空下升华后，表面喷镀铂碳膜，制成表面复型膜。 从真空取出后，放在蒸馏水中剥离出复型膜，再置入浓硝酸 中将残留的样品溶解，经蒸馏水漂洗后打捞于铜网上，待干 后于电镜下观察。此法常用于观察细胞内部结构，得到的为 生动的立体浮雕图像
（三）扫描电子显微镜的样品制备方法及过程 1．扫描电子显微镜的样品制备方法 （1）表面复型法：该法是用碳、硅或火棉胶液的薄膜将标本 的表面拓印下来，再在透射电镜观察印在薄膜的精细结构。 此法常用于观察细胞或组织的表面结构。 （2）冰冻蚀刻法：此法是先将样品快速冻结，然后在真空喷 镀仪中用冷刀切小削样品，使其暴露细胞的内部结构，待切 面的冰在真空下升华后，表面喷镀铂碳膜，制成表面复型膜。 从真空取出后，放在蒸馏水中剥离出复型膜，再置入浓硝酸 中将残留的样品溶解，经蒸馏水漂洗后打捞于铜网上，待干 后于电镜下观察。此法常用于观察细胞内部结构，得到的为 生动的立体浮雕图像
2.扫描电子显微镜的样品制备过程 由于观察目的不同，除了使用相同的固定液外， 扫描电子显微镜生物样品制备与透电子显微镜射有 较大的差异。为了得到无损、真实而清晰的表面形 貌结构，在扫描电子显微镜样品制备的全过程中都 必须十分小心地保护被观察面，因此在二次电子表 面形貌成像工作状态下，必须满足下述四项基本要 求： ①样品的被观察面应充分的暴露出来（在所要 求的二次电子图像分辨率水平上)，无污染、无皱 缩、无明显的人工损伤及附加结构
2．扫描电子显微镜的样品制备过程 由于观察目的不同，除了使用相同的固定液外， 扫描电子显微镜生物样品制备与透电子显微镜射有 较大的差异。为了得到无损、真实而清晰的表面形 貌结构，在扫描电子显微镜样品制备的全过程中都 必须十分小心地保护被观察面，因此在二次电子表 面形貌成像工作状态下，必须满足下述四项基本要 求： ①样品的被观察面应充分的暴露出来（在所要 求的二次电子图像分辨率水平上），无污染、无皱 缩、无明显的人工损伤及附加结构
②镀一层均匀的重金属导电材料（金、铂、钯铱 和金等)，造成被观察表面的“质量一密度”一致性。 “厚度”即要大于等于入射点子束进入样品的扩散深 度，又不能掩盖样品本身的凹凸形貌结构。同时，样 品表面的二次电子发射率要高。 ③样品、样品与样品托之间导电性要好。 ④能耐受高能量的入射电子和高真空，不变形、 不升华
②镀一层均匀的重金属导电材料（金、铂、钯铱 和金等），造成被观察表面的“质量—密度”一致性。 “厚度”即要大于等于入射点子束进入样品的扩散深 度，又不能掩盖样品本身的凹凸形貌结构。同时，样 品表面的二次电子发射率要高。 ③样品、样品与样品托之间导电性要好。 ④能耐受高能量的入射电子和高真空，不变形、 不升华
在取材时，针对不同的样品、不同的观察要 求，采取不同的技术，使被观察表面充分地暴露 出来；脱水时，为了避免观察表面皱缩变形，设 计了特殊的干燥方法；此外，还必须对样品进行 导电处理，在样品表面喷镀一层厚度适当、均匀 的金属膜
在取材时，针对不同的样品、不同的观察要 求，采取不同的技术，使被观察表面充分地暴露 出来；脱水时，为了避免观察表面皱缩变形，设 计了特殊的干燥方法；此外，还必须对样品进行 导电处理，在样品表面喷镀一层厚度适当、均匀 的金属膜
三、实验仪器、材料和试剂 1.仪器、用具：临界点干燥器、离子溅射仪、 超声波清洗机、电吹风机、磁力搅拌器、干燥器、 抛光膏、刀片、剪刀、镊子、样品盒、酒精灯、 牙签、竹签、培养皿、烧杯、量筒、量杯、注射 器、载玻片、脱脂棉、导电胶。 2.试剂：2.5%戊二醛溶液、1%0S04溶液、 0.2mo1/LPBS溶液、醋酸异戊酯、液体C02、双 蒸水。 3.材料：生物样品（植物花粉、昆虫口器和附 肢)
三、实验仪器、材料和试剂 1．仪器、用具：临界点干燥器、离子溅射仪、 超声波清洗机、电吹风机、磁力搅拌器、干燥器、 抛光膏、刀片、剪刀、镊子、样品盒、酒精灯、 牙签、竹签、培养皿、烧杯、量筒、量杯、注射 器、载玻片、脱脂棉、导电胶。 2．试剂：2.5%戊二醛溶液、1% OSO4溶液、 0.2mol/L PBS溶液、醋酸异戊酯、液体CO2、双 蒸水。 3．材料：生物样品(植物花粉、昆虫口器和附 肢)