组织培养报告 探究不同激素浓度配比与烟草叶片愈伤组织诱导的关系 姓名:郭林 学号:_10121910202 组员:覃治祯 日期:2014年11月13日
组织培养报告 探究不同激素浓度配比与烟草叶片愈伤组织诱导的关系 姓 名： 郭 林 学 号： 10121910202 组 员： 覃治祯 日 期：2014 年 11 月 13 日
目录 关键词 0背景… 1材料和方法 1.1实验材料 12组织培养环境 13试剂和器材 22233333 13.1实验试剂 1.3.2实验仪器 14实验方法 141培养基的配制… 14.2外植体前处理与接种 143观察产生愈伤组织 144愈伤组织的培养 2结果 21诱导率 555 22形态学… 3讨论与分析 3.1外植体的选择 32内源激素对愈伤组织诱导的关系… 3.3外源激素对愈伤组织诱导的影响 参考文献 附录
1 目录 摘要 ..................................................................................................................................................2 关键词 ..............................................................................................................................................2 0 背景 ...............................................................................................................................................2 1 材料和方法....................................................................................................................................3 1.1 实验材料.............................................................................................................................3 1.2 组织培养环境.....................................................................................................................3 1.3 试剂和器材.........................................................................................................................3 1.3.1 实验试剂..................................................................................................................3 1.3.2 实验仪器..................................................................................................................4 1.4 实验方法.............................................................................................................................4 1.4.1 培养基的配制..........................................................................................................4 1.4.2 外植体前处理与接种..............................................................................................4 1.4.3 观察产生愈伤组织..................................................................................................5 1.4.4 愈伤组织的培养......................................................................................................5 2 结果 ...............................................................................................................................................5 2.1 诱导率.................................................................................................................................5 2.2 形态学.................................................................................................................................5 3 讨论与分析....................................................................................................................................7 3.1 外植体的选择.....................................................................................................................7 3.2 内源激素对愈伤组织诱导的关系.....................................................................................8 3.3 外源激素对愈伤组织诱导的影响.....................................................................................9 参考文献.........................................................................................................................................10 附录 ................................................................................................................................................12
探究激素浓度配比与烟草叶片愈伤组织诱导的关系 摘要:本实验以MS培养基为基础培养,分别在MS+6BA1mgL+NAA02mg 和MS+6-BA0.mg+NAA0.5mg/L两种培养基上对烟草叶片进行愈伤组织的诱 导,探究相同烟草叶片不同激素6-BA和NAA浓度配比对烟草叶片愈伤组织诱 导的关系。结果表明在MS+6BA1mg/L+NAA02mg/L培养基上诱导出的愈伤 组织更利于叶的分化,且诱导出的愈伤组织的体积较大,在 MS+6- BAO. Img/L+NAA0.5mgL培养基上诱导出的愈伤组织更利于根的诱导, 且诱导出的愈伤组织的体积较小。 关键词:烟草,脱分化,愈伤组织,培养基,激素 0背景 我国大多数师范院校都普遍开设植物生理学或植物生物技术类实验课程,其 中植物组织培养技术作为一项基础技术成为必修实验。我校植物组织培养实验属 于《植物生理学实验》课的一部分,实验内容以诱导叶片脱分化形成愈伤组织为 主。实验部分仍然按照传统的教学环节进行培养基配制(3学时)和无菌操作(3 学时),着重实验技术的指导与学习。 根据植物细胞全能性的原理,特别是在生长素和细胞分裂素的作用下,植物 可以脱分化成愈伤组织。烟草( Nicotiana tabacun),茄科,多年生植物,是重 要的模式生物,因此也被我校选为植物组织培养的材料。众所周知,生长素在植 物体内分布是不均匀的,嫩叶中生长素分布较多,老叶中分布较少,在诱导植物 形成越伤组织的过程中,内源激素在一定程度上也起着重要的调节作用。除此之 外,选取的外源激素的浓度配比不同都会对愈伤组织有一定影响。胡伟、陈豫、 伍洋等人在对不同激素浓度配比对萝卜愈伤组织形成的影响中发现,在以萝卜直 根为实验材料,不同激素NAA、2,4-D、6-BA浓度配比对萝卜外植体形成愈伤 组织诱导率和质量有一定的影响。20世纪50年代以来,烟草愈伤组织的诱导 遵循 Skoog-MiUer分化模式:培养基内生长素和细胞分裂素的浓度和比值制约芽
2 探究激素浓度配比与烟草叶片愈伤组织诱导的关系 摘要：本实验以 MS 培养基为基础培养，分别在 MS+6-BA 1 mg/L +NAA 0.2 mg/L 和 MS+6-BA0.1mg/L+NAA 0.5mg/L 两种培养基上对烟草叶片进行愈伤组织的诱 导，探究相同烟草叶片不同激素 6-BA 和 NAA 浓度配比对烟草叶片愈伤组织诱 导的关系。结果表明在 MS+6-BA 1 mg/L +NAA 0.2 mg/L 培养基上诱导出的愈伤 组 织 更 利 于 叶的分化 ， 且诱导出的愈伤组织的体积较大， 在 MS+6-BA0.1mg/L+NAA 0.5mg/L 培养基上诱导出的愈伤组织更利于根的诱导， 且诱导出的愈伤组织的体积较小。 关键词：烟草，脱分化，愈伤组织，培养基，激素 0 背景 我国大多数师范院校都普遍开设植物生理学或植物生物技术类实验课程，其 中植物组织培养技术作为一项基础技术成为必修实验。我校植物组织培养实验属 于《植物生理学实验》课的一部分，实验内容以诱导叶片脱分化形成愈伤组织为 主。实验部分仍然按照传统的教学环节进行培养基配制（3 学时）和无菌操作（3 学时），着重实验技术的指导与学习。 根据植物细胞全能性的原理，特别是在生长素和细胞分裂素的作用下，植物 可以脱分化成愈伤组织。烟草（Nicotiana tabacum），茄科，多年生植物，是重 要的模式生物，因此也被我校选为植物组织培养的材料。众所周知，生长素在植 物体内分布是不均匀的，嫩叶中生长素分布较多，老叶中分布较少，在诱导植物 形成越伤组织的过程中，内源激素在一定程度上也起着重要的调节作用。除此之 外，选取的外源激素的浓度配比不同都会对愈伤组织有一定影响。胡伟、陈豫、 伍洋等人在对不同激素浓度配比对萝卜愈伤组织形成的影响中发现，在以萝卜直 根为实验材料，不同激素 NAA、2,4-D、6-BA 浓度配比对萝卜外植体形成愈伤 组织诱导率和质量有一定的影响。[1] 20 世纪 50 年代以来，烟草愈伤组织的诱导 遵循 Skoog-MiUer 分化模式：培养基内生长素和细胞分裂素的浓度和比值制约芽
和根的分化。这一原则被广泛地应用于植物组织培养实践。细胞分裂素的浓度低, 生长素的浓度高时易形成愈伤组织;反之,细胞分裂素浓度高,生长素的浓度低 时,有利于芽的分化。本课题实验选用烟草叶片,进行愈伤组织的诱导,并观察 其在不同激素浓度的培养基上的诱导情况 1材料和方法 1.1实验材料 烟草( Nicotiana tabacum)叶片 12组织培养环境 培养条件为28℃,暗处理一周后,进行24小时光照培养。如图1所示。 图表1烟草愈伤组织培养环境 Fig 1 Tobacco callus culture environment 13试剂和器材 13.1实验试剂 MS培养基(配方见附录)、琼脂、蔗糖、6-BA,NAA,75%酒精,0.1%HgCl2 等
3 和根的分化。这一原则被广泛地应用于植物组织培养实践。细胞分裂素的浓度低， 生长素的浓度高时易形成愈伤组织；反之，细胞分裂素浓度高，生长素的浓度低 时，有利于芽的分化。本课题实验选用烟草叶片，进行愈伤组织的诱导，并观察 其在不同激素浓度的培养基上的诱导情况。 1 材料和方法 1.1 实验材料 烟草（Nicotiana tabacum）叶片 1.2 组织培养环境 培养条件为 28℃，暗处理一周后，进行 24 小时光照培养。如图 1 所示。 图表 1 烟草愈伤组织培养环境 Fig.1 Tobacco callus culture environment. 1.3 试剂和器材 1.3.1 实验试剂 MS 培养基(配方见附录)、琼脂、蔗糖、6-BA，NAA，75%酒精，0.1%HgCl2 等
1.3.2实验仪器 烧杯、玻璃棒、量筒、容量瓶、漏斗、培养室、无菌室、超净工作台、髙压 灭菌锅、三角烧瓶、移液枪、棉线、培养皿、滤纸、解剖刀、剪刀、镊子、牛皮 纸、称量纸、天平、酒精灯、打火机、直尺 14实验方法 141培养基的配制 本实验选用MS培养基为基础培养基加不同配比的激素及浓度。激素配比如 表1所示。 表1两个实验组激素的浓度配比 6-BA NAA 第一组 Img/L 0. 2mg/L 第二组0mgL0.5mgL 14.11称取15g蔗糖溶解于100mL水,定容到500mL配制MS培养基,平均分 装到两个锥形瓶中。并按照表1所示加入激素配比 141.2调节PH至58,然后分别分装到5个装有04g琼脂的100mL锥形瓶中, 用一层称量纸和一层牛皮纸包扎瓶口,棉线扎牢,然后将培养基和解剖工具、装 有滤纸的培养皿、蒸馏水一起在高压灭菌锅中121℃,20分钟灭菌备用 142 2外植体前处理与接种 14.21选取健壮的烟草叶片在自来水下将表面的灰尘及杂质冲洗掉,切成小快; 14.2.2在无菌室用75%酒精侵洗30s,然后用无菌水洗3-5次 14.2.3叶片放于0.1%升汞溶液中浸泡3-5min,然后无菌水洗3-5次,滤纸吸干; 14.2.4把叶片切成15cm*1.5cm小块,转移植物到培养基中进行培养,每瓶3 块
4 1.3.2 实验仪器 烧杯、玻璃棒、量筒、容量瓶、漏斗、培养室、无菌室、超净工作台、高压 灭菌锅、三角烧瓶、移液枪、棉线、培养皿、滤纸、解剖刀、剪刀、镊子、牛皮 纸、称量纸、天平、酒精灯、打火机、直尺。 1.4 实验方法 1.4.1 培养基的配制 本实验选用 MS 培养基为基础培养基加不同配比的激素及浓度。激素配比如 表 1 所示。 表 1 两个实验组激素的浓度配比 6-BA NAA 第一组 1mg/L 0.2mg/L 第二组 0.1mg/L 0.5mg/L 1.4.1.1 称取 15g 蔗糖溶解于 100mL 水，定容到 500mL 配制 MS 培养基，平均分 装到两个锥形瓶中。并按照表 1 所示加入激素配比。 1.4.1.2 调节 PH 至 5.8，然后分别分装到 5 个装有 0.4g 琼脂的 100mL 锥形瓶中， 用一层称量纸和一层牛皮纸包扎瓶口，棉线扎牢，然后将培养基和解剖工具、装 有滤纸的培养皿、蒸馏水一起在高压灭菌锅中 121℃，20 分钟灭菌备用。 1.4.2 外植体前处理与接种 1.4.2.1 选取健壮的烟草叶片在自来水下将表面的灰尘及杂质冲洗掉，切成小快； 1.4.2.2 在无菌室用 75%酒精侵洗 30s，然后用无菌水洗 3-5 次； 1.4.2.3 叶片放于 0.1%升汞溶液中浸泡 3-5min，然后无菌水洗 3-5 次，滤纸吸干； 1.4.2.4 把叶片切成 1.5cm*1.5cm 小块，转移植物到培养基中进行培养，每瓶 3 块